1.一种稳定性提高的纳豆激酶突变体,其特征在于,所述突变体是将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的纳豆激酶的第59位、第218位的一个或两个氨基酸位点进行突变。
2.根据权利要求1所述的突变体,所述突变体是将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的纳豆激酶的第218位的天冬酰胺突变为天冬氨酸。
3.根据权利要求1所述的突变体,其特征在于,所述突变体是将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的纳豆激酶的第59位的谷氨酰胺突变为谷氨酸,同时将第218位的天冬酰胺进行突变为天冬氨酸。
4.表达权利要求1-3任一所述突变体的重组菌。
5.根据权利要求4所述重组菌的构建方法:将纳豆激酶突变体的基因连接在载体pET24a上,以大肠杆菌BL21位宿主,构建重组菌。
6.根据权利要求4所述重组菌表达纳豆激酶突变体的方法,其特征在于,所述方法的具体步骤如下:(1)将重组菌接种于含卡那霉素的LB培养基,35-38℃、150-250r/min振荡过夜培养得到种子液。
(2)将种子液按质量分数为1-2%的接种量分别接种于含卡那霉素浓度的表达培养基中,35-38℃、150-250r/min振荡培养至OD600至0.6-0.8时,加入诱导剂IPTG,于15-18℃诱导
18-24h纳豆激酶突变体的表达。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述诱导剂IPTG至0.05-0.2mM。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述表达培养基为TB培养基,所述TB培养基组分为:胰蛋白胨10-14g/L,酵母提取物20-26g/L,甘油3-8g/L,KH2PO42.0-2.6g/L,K2HPO4·3H2O 15.8-16.8g/L,CaCl20.15-0.25g/L,余量为水。
9.根据权利要求6-8所述的方法得到的纳豆激酶突变体。
10.根据权利要9所述的纳豆激酶突变体在在制备用于治疗心脑血管疾病药物中的应用。