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专利号: 201711155979X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述方法以白地霉(Geotrichum candidum)ZJPH1704经发酵培养获得的湿菌体为酶源,以2,6-二氯-3-氟苯乙酮为底物,以甘油为辅助底物,以pH 6~9的缓冲液为反应介质构成反应体系,在25~50℃、150~250rpm条件下进行反应,反应结束后,将反应液分离纯化,获得(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇;

所述白地霉(Geotrichum candidum)ZJPH1704,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:M 2017380,保藏日期为:2017年6月26日,保藏地址为中国武汉,武汉大学,邮编430072。

2.如权利要求1所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述底物用量以缓冲液体积计为0.1~10g/L,湿菌体用量以缓冲液体积计为50~450g/L。

3.如权利要求1所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述反应体系中还含有辅助底物,所述辅助底物为下列之一:葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甲醇、乙醇、异丙醇、甘油、L-丙氨酸、L-谷氨酸或L-半胱氨酸。

4.如权利要求3所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述辅助底物用量以缓冲液体积计为4~200g/L。

5.如权利要求3所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述反应介质中还添加有机溶剂,所述有机溶剂为下列之一:甘油、正己烷、二氯甲烷、乙酸异丙酯、乳化剂OP-

10、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或邻苯二甲酸二丁酯。

6.如权利要求5所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述有机溶剂体积加量以缓冲液体积计为0.5~20%。

7.如权利要求3所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述反应介质中还添加离子液体,所述离子液体为下列之一:1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐、四甲基铵六氟磷酸盐、1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐、N-丁基吡啶四氟硼酸盐、四甲基铵四氟硼酸盐、四甲基铵谷氨酸、四乙基铵谷氨酸、四甲基铵半胱氨酸、[氯化胆碱]+[甘氨酸]-或[氯化胆碱]+[谷胱甘肽]-。

8.如权利要求7所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述离子液体的质量添加量以缓冲液体积计为0.1~10g/L。

9.如权利要求1所述克唑替尼手性中间体的制备方法,其特征在于所述所述酶源按如下方法制备:(1)斜面培养:将白地霉ZJPH1704接种至斜面培养基,25~30℃培养24h,获得斜面菌种;斜面培养基终浓度组成为:葡萄糖15g/L,蛋白胨7.5g/L,酵母膏6g/L,(NH4)2SO4 

3g/L,KH2PO4 1.5g/L,NaCl 0.75g/L,MgSO4·7H2O 0.75g/L,琼脂粉15~20g/L,溶剂为蒸馏水,pH 6.5;

(2)种子培养:将斜面菌种接种至种子培养基中,25~30℃、150~250rpm培养10~24h,获得种子液;种子培养基终浓度组成为:葡萄糖15g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L,(NH4)

2SO4 2g/L,KH2PO4 2g/L,NaCl 1g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,溶剂为蒸馏水,pH 6.5;

(3)发酵培养:将种子液以体积浓度为4~10%的接种量接种至发酵培养基中,装液量为100mL/250mL摇瓶,25~30℃、150~250rpm培养24~28h,发酵结束后,将发酵液离心,所得沉淀用0.1M、pH 6.5缓冲液洗涤,收集湿菌体,即为酶源;所述发酵培养基终浓度组成为:葡萄糖24.45g/L,蛋白胨15.75g/L,(NH4)2SO4 21.39g/L,溶剂为蒸馏水,pH 6.5。

10.一种用于制备权利要求1所述克唑替尼手性中间体的白地霉ZJPH1704,所述白地霉(Geotrichum candidum)ZJPH1704,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:M 2017380,保藏日期为:2017年6月26日,保藏地址为中国武汉,武汉大学,邮编430072。