1.不动杆菌(Acinetobacter sp.)ZJPH1806,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:2019214,保藏日期:2019年3月29日,地址:中国,武汉,武汉大学,邮编:
430072。
2.一种权利要求1所述不动杆菌ZJPH1806在催化2,2',4'-三氯苯乙酮不对称还原制备(R)-2-氯-1-(2,4-氯苯基)乙醇中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:以不动杆菌ZJPH1806经发酵培养获得的湿菌体为酶源,以2,2',4'-三氯苯乙酮为底物,加入二甲基亚砜,以pH 5~9的缓冲液为反应介质构成转化体系,在25~50℃、150~250rpm条件下进行转化反应,反应结束后,将转化液分离纯化,获得(R)-2-氯-1-(2,4-氯苯基)乙醇。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述转化体系中,底物用量以缓冲液体积计为
0.1~10g/L,湿菌体用量以缓冲液体积计为100~450g/L。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述转化体系中还添加有辅助底物,所述辅助底物为下列之一:麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、乙醇、异丙醇、甘油。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述辅助底物为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖或甘油时,加入量为20~300g/L缓冲液,辅助底物为乙醇或异丙醇时,加入体积为缓冲液体积的10~30%。
7.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述缓冲液为0.1M、pH 7.6的磷酸盐缓冲液。
8.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述湿菌体细胞由如下方法获得:将不动杆菌ZJPH1806接种至发酵培养基,30℃、200rpm摇床培养24h,发酵液经离心、洗涤沉淀,收集得到湿菌体细胞;所述发酵培养基终浓度组成如下:葡萄糖20~40g/L,玉米浆40~70g/L,KH2PO4 0.5~2g/L,溶剂为水,pH 6.0~9.0。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述湿菌体在发酵前先进行活化和扩大培养,具体为:
(1)斜面培养:将不动杆菌ZJPH1806接种至斜面培养基,30℃恒温培养箱培养1~2d,获得斜面菌种,4℃冰箱保存;斜面培养基终浓度组成为:葡萄糖15g/L,蛋白胨7.5g/L,酵母膏
6g/L,(NH4)2SO4 3g/L,KH2PO4 1.5g/L,NaCl 0.75g/L,MgSO4·7H2O 0.75g/L,琼脂粉20g/L,溶剂为水,pH 6.5;
(2)种子培养:将斜面菌种接种至种子培养基中,30℃、200rpm培养12h,获得种子液;种子培养基组成为:葡萄糖15g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L,(NH4)2SO4 2g/L,KH2PO4 2g/L,NaCl 1g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,溶剂为水,pH 6.5;
(3)发酵培养:将种子液以体积浓度10%的接种量转接至发酵培养基中,30℃,200rpm培养24h,将发酵液于4℃,9000rpm条件下离心15min,弃去上清,并用pH 6.5磷酸缓冲液洗涤菌体两次,再次离心分离获得湿菌体。
10.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:取0.1M pH为7.6的磷酸盐缓冲液,加入不动杆菌ZJPH1806湿菌体细胞,底物,二甲基亚砜和甘油构成转化体系,30℃、200rpm摇床振荡转化24h,反应结束后将转化液离心,取上清液,加入等体积的乙酸乙酯萃取两次,得到(R)-2-氯-1-(2,4-氯苯基)乙醇;所述湿菌体细胞浓度以湿重计为100g/L缓冲液,底物浓度为2g/L,DMSO体积加入量10%,甘油加入量为200g/L。