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专利号: 2025101267520
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种羰基还原酶BsCR突变体,其特征在于,所述的羰基还原酶BsCR突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列突变为下列序列:第178位异亮氨酸突变为亮氨酸、第179位的苏氨酸突变为亮氨酸。

2.一种含权利要求1所述羰基还原酶BsCR突变体编码基因的重组基因工程菌。

3.一种权利要求1所述羰基还原酶BsCR突变体在不对称还原2,6‑二氯‑3‑氟苯乙酮制备克唑替尼关键手性中间体中的应用。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述应用的方法为:以羰基还原酶BsCR突变体的重组基因工程菌经诱导培养获得的湿菌体为催化剂,以2,6‑二氯‑3‑氟苯乙酮为底物,以葡萄糖为辅底物,采用pH 4.0‑9.0的缓冲液为反应介质构成反应体系,30 80℃、800‑~

1000 rpm条件下进行反应,反应结束,反应液经分离纯化,反应液使用乙酸乙酯萃取,获得(S)‑2,6‑二氯‑3‑氟苯乙醇。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的反应体系中,底物加入终浓度1 100 ~g/L;葡萄糖添加量与底物摩尔比为1 5:1;催化剂用量以湿菌体重量计为10 50 g WCW/L,~ ~以湿菌体干重计为2 10 g DCW/L。

~

6.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的反应体系中添加二甲基亚砜为助溶剂,二甲基亚砜体积加入浓度为10‑80%。

7.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述反应介质为pH 6.0、100 mM的磷酸钠缓冲液。

8.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述湿菌体按如下方法制备:将含羰基还原酶BsCR突变体基因的工程菌接种到含有终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃培养10h,获得种子液;将种子液以体积浓度1%的接种量接种到新鲜的含终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、180 rpm培养至OD600=0.6~0.8,再向培养液中加入终浓度为0.15 mM异丙基β‑D‑硫代半乳糖苷,20℃培养16 h后,4℃、8000 rpm离心10 min,获得湿菌体。