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专利号: 2017107202826
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-04-28
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器,其特征在于,所述荧光化学传感器包括:转录因子NF-κBp50结合探针和辅助探针;

其中,转录因子NF-κBp50结合探针由一个p50-s探针与p50反探针杂化组成,p50-s探针与p50反探针序列上有两个不相邻的转录因子识别位点,所述p50-s探针转录因子识别位点序列为5'-GGG ACT TTC C-3',两个转录因子识别位点之间的存在磷酸二酯键为硫代修饰;

所述p50-s探针与p50反探针上均设计有2-氨基嘌呤荧光基;所述p50-s探针与p50反探针5'端的磷酸二酯键均为硫代修饰;

所述辅助探针为与p50-s探针、p50反探针近5'端的部分碱基序列互补。

2.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器,其特征在于,所述荧光化学传感器还包括核酸外切酶III,Nb.BtsI内切酶,λ核酸外切酶和KF聚合酶。

3.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器,其特征在于,所述p50-s探针长度为66nt,所述p50-s探针的碱基序列为:5'-A*A*A ACT CAC TGC ACT CGA TCG GAC AGA TGG GAC TTT CCT TGA TA*G*GAC CTG GGG GAC TTT CCAATA-3',其中,*代表硫代修饰,A代表2-氨基嘌呤取代碱基。

4.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器,其特征在于,所述p50反探针长度为66nt,所述p50反探针的碱基序列为:5'-A*A*A ACT CAC TGC ACT CGA TCG GAC TAT TGG AAA GTC CCC CAG GT*C*CTA TCA AGG AAAGTC CCA TCT-3',其中,*代表硫代修饰,A代表2-氨基嘌呤取代碱基。

5.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器,其特征在于,所述辅助探针长度为16nt,所述辅助探针的碱基序列为:5'-T*TC GAT CGA GTG CA*C*A-3',其中,*代表硫代修饰。

6.如权利要求1所述的一种检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器,其特征在于,所述荧光化学传感还包括转录因子NF-κBp50结合探针和NF-κBp50结合时的反应缓冲液,所述反应缓冲液包括:10毫摩尔每升pH值为7.5的Tris-HCl缓冲液,100毫摩尔每升氯化钾,2毫摩尔每升氯化镁,0.1毫摩尔每升乙二胺四乙酸,0.1毫克每毫升的酵母tRNA,10%甘油,0.25毫摩尔每升二硫苏糖醇。

7.权利要求1-6任一项所述荧光化学传感器用于检测转录因子NF-κBp50的方法,其特征在于,具体包括:

1)将待测样品加入所述转录因子NF-κBp50结合探针反应溶液中孵育反应,而后加入外切酶III进行消化;

2)向步骤1)消化后溶液中加入dNTP,KF聚合酶,Nb.BtsI内切酶,λ核酸外切酶进行孵育反应;

3)对步骤2)孵育反应后的溶液中的荧光光谱进行检测,实现对待测样品中的转录因子NF-κBp50的定量分析。

8.如权利要求7所述的荧光化学传感器用于检测转录因子NF-κBp50的方法,其特征在于,步骤1)中孵育反应条件为:35-40℃,反应时间为20~60min;消化反应条件为:37℃消化

10min,然后在80℃条件下加热10min终止消化反应;

步骤2)中孵育反应条件为:35-40℃,反应时间为40~70min;

步骤3)中采用荧光分光光度计对荧光光谱进行检测,在激发波长为310nm,在365nm处的荧光强度进行数据分析。

9.如权利要求8所述的荧光化学传感器用于检测转录因子NF-κBp50的方法,其特征在于,步骤1)中:反应温度为37℃,反应时间为30min。

10.如权利要求8所述的荧光化学传感器用于检测转录因子NF-κBp50的方法,其特征在于,步骤2)中:反应温度为37℃,反应时间为50min。

11.权利要求1-6任一项所述检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器在定量检测转录因子NF-κBp50中的应用。

12.权利要求7-10任一项所述荧光化学传感器用于检测转录因子NF-κBp50的方法在定量检测转录因子NF-κBp50中的应用。

13.权利要求1-6任一项所述检测细胞内转录因子NF-κBp50的荧光化学传感器在筛选转录因子NF-κBp50抑制剂和/或激活剂中的应用。

14.权利要求7-10任一项所述荧光化学传感器用于检测转录因子NF-κBp50的方法在筛选转录因子NF-κBp50抑制剂和/或激活剂中的应用。