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专利号: 2017104326969
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-10-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于同时检测多种DNA糖基化酶的探针组合,其特征在于,包括:双功能DNA探针、触发探针1、触发探针2、2-AP信号探针和P-dC信号探针;

所述双功能DNA探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;

触发探针1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;

触发探针2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;

2-AP信号探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;

P-dC信号探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.权利要求1所述的探针组合在制备同时检测多种DNA糖基化酶的试剂盒或芯片中的用途。

3.一种同时检测多种DNA糖基化酶的试剂盒,其特征在于,该试剂盒中包含权利要求1所述的探针组合。

4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,试剂盒中还包括:反应缓冲液、Nb.BtsI内切酶和Lambda核酸外切酶。

5.如权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述反应缓冲液中含有:10×NEB缓冲液2、BSA、10×UDG反应缓冲液、10×Lambda核酸外切酶反应缓冲液。

6.如权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,该试剂盒同时检测hOGG1和UDG的方法步骤如下:(1)将双功能DNA探针、触发探针1和触发探针2在含有NaCl、Tris-HCl和EDTA的缓冲液中孵育,孵育后冷却,形成三明治杂交DNA底物;

(2)分别将2-AP信号探针和P-dC信号探针在含有MgCl2和Tris-HCl的缓冲液中孵育,孵育后冷却,使2-AP信号探针和P-dC信号探针折叠,形成发夹结构;

(3)向反应缓冲液中加入三明治杂交DNA底物和待检测样品,孵育,孵育后加入步骤(2)中形成发夹结构的2-AP信号探针和P-dC信号探针,以及Nb.BtsI内切酶和Lambda核酸外切酶,黑暗条件下继续孵育,将孵育后的反应产物分别在365nm和450nm处进行荧光强度检测,分别用于hOGG1和UDG的定量分析。

7.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,步骤(1)中,孵育的温度为95℃,孵育的时间为5min。

8.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,步骤(1)中,所述缓冲液中含有50毫摩尔每升NaCl,10毫摩尔每升Tris-HCl和1毫摩尔每升EDTA。

9.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,步骤(3)中,孵育的温度为37℃,孵育的时间为60min。

10.权利要求1所述的探针组合或权利要求3-5任一项所述的试剂盒在筛选DNA糖基化酶抑制剂中的用途。