1.一种异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)选用巴马香猪皮为皮源,对取皮区进行脱毛、消毒,用取皮机取下大张皮肤,无菌生理盐水清洗,皮鼓反取成0.25~0.5mm的断层皮片,采用激光打孔技术对断层皮片进行制孔,备用;
(2)将步骤(1)制得的断层皮片浸泡于0.5~1.0%(m/v)的邻苯基苯酚钠水溶液中,处理6~8min,无菌生理盐水清洗3~4次,然后加入1~2%(m/v)三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液,超声震荡处理6~12h,每2h更换一次溶液,其中加入的三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液与断层皮片的重量比为10:1,得到去表皮的真皮;
(3)将步骤(2)得到的去表皮的真皮置于0.2~0.4%TritonX-100(v/v)溶液中,室温下振荡洗涤6~12h,用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次,加入脱细胞处理液,在37℃条件下作用12~24h,所述的脱细胞处理液与去表皮的真皮的重量比为10:1,用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次,再用无菌生理盐水清洗3~4次,得到脱细胞真皮;
(4)将步骤(3)得到的脱细胞真皮放入转鼓中,然后分次加入温度为35℃、pH为5.7的羧甲基壳聚糖溶液,反应30min后调节pH值至5.0,再反应75min,调节pH值至6.8,处理完毕后放净废液,再将处理后的材料用无菌生理盐水洗2次,每次15分钟,洗后控干水,得到脱细胞真皮基质;
(5)将经步骤(4)处理得到的脱细胞真皮基质浸泡于体积浓度为0.1~0.3%(v/v)的戊二醛溶液中交联15~30min,无菌生理盐水冲洗10~15min,然后置于柔化剂溶液中浸泡30~60min,清洗后再放入保湿剂溶液中,37℃保温处理30~60min,最后用无菌生理盐水充分冲洗去除残留;
(6)将经步骤(5)处理得到的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机的冷冻室内冻干后,成型包装,再经γ射线辐照消毒灭菌,即为成品。
2.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中的邻苯基苯酚钠水溶液含有0.01~0.1%(v/v)的二丙二醇二甲醚。
3.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中的三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液含有1~3%(m/v)三聚磷酸钠、0.01~0.04%(v/v)的二丙二醇二甲醚和0.1~0.4%(m/v)聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯。
4.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)脱细胞处理液为含有0.025%(m/v)的胰酶、0.02%(m/v)EDTA、0.4~1.0%(m/v)十二酰基甘氨酸钠和0.1~1.0%(m/v)聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯,浓度为1~2%(m/v)三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液。
5.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中脱细胞真皮与羧甲基壳聚糖溶液的重量比为1:2~4。
6.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中的柔化剂选自十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十七烷基-N-氨乙基咪唑啉环氧丙烷、十八烷基二甲基苄基氯化铵中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中的柔化剂溶液浓度为1~5%(m/v)。
8.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中的保湿剂选自丙三醇、透明质酸、吡咯烷酮羧酸钠、二甲基氨酸脯氨酸、十八烷基二甲基氧化胺中的至少一种。
9.根据权利要求1所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中的保湿剂溶液浓度为0.2~1%(m/v)。
10.根据权利要求1-9任一所述的异种脱细胞真皮基质的制备方法制得的异种脱细胞真皮基质。