1.一种基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于具体步骤如下:(1)石墨烯的分散
将5.0 10.0 mg石墨烯溶于5.0 10.0 mL浓度为0.1 0.3 M的pH=5.0 6.0的醋酸缓冲液~ ~ ~ ~中,于超声清洗器中超声分散2 5 h,得到石墨烯分散液;
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(2)银纳米簇的制备
a. 依次移取1.0 3.0 μL二次蒸馏水,5.0 10.0 μL浓度为10.0 15.0 μM的DNA溶液,~ ~ ~
1.0 2.0 μL浓度为10.0 15.0 mM的dCTP溶液,1.0 2.0 μL 5×TdT反应缓冲液及0.2 0.4 μ~ ~ ~ ~L浓度为10.0 20.0 U/μL的TdT溶液于PCR管中,振荡2 5 min使试剂混合均匀,然后置于35~ ~ ~
38 ℃恒温水浴中反应2 3 h后,再将PCR管置于70 80 ℃水浴中10 20 min使反应终止,得~ ~ ~到延伸后的DNA反应液;其中所述的DNA为3′端修饰有羟基的单链DNA;
b. 依次移取25.0 50.0 μL浓度为20.0 40.0 mM、pH=7.0的磷酸缓冲液,5.0 10.0 μL~ ~ ~延伸后的DNA反应液,5.0 10.0 μL浓度为1.0 3.0 mM的硝酸银水溶液,10.0 20.0 μL二次~ ~ ~蒸馏水于PCR管中,振荡使溶液混合均匀,然后冰浴孵育15 20 min使银离子与DNA相结合,~向孵育后的混合液中迅速加入5.0 10.0 μL新配制的浓度为1.0 3.0 mM的硼氢化钠水溶~ ~液,持续振荡1 2 min使银离子被还原后,将PCR管用锡箔纸包裹,室温下避光反应1.5 2.5 ~ ~h,得到银纳米簇;
(3)电化学生物传感器的制备
a. 首先将玻碳电极在麂皮上用三氧化二铝粉末抛光2 5 min,抛光后将电极置于超声~清洗器中用二次蒸馏水中超声清洗2 5 min,然后用N2吹干,得到裸玻碳电极;
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b. 利用循环伏安法将氧化石墨烯电沉积到裸玻碳电极得到GO/GCE;在GO/GCE上滴加
3.0 5.0 μLDNA-AgNCs溶液,避光组装10 20 min后,用二次蒸馏水缓缓冲洗电极,得到基于~ ~DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器。
2.根据权利要求1所述的一种基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的过氧化氢传感器的制备方法,其特征在于:步骤(3)循环伏安法中电位控制在-1.5 0.5 V,扫速为10 mV/s。
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3.一种利用权利要求1-2中所述的基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器检测过氧化氢的方法,其特征在于:利用循环伏安法,设置电位范围为-1.2 0 V,扫~速为50 mV/s,检测DNA-AgNCs/GO/GCE在浓度为100.0 mM、pH=7.0的PBS缓冲液中对H2O2的电化学响应,根据还原峰电流的大小确定过氧化氢浓度的关系。
4.一种利用上述基于DNA信号放大技术合成银纳米簇的电化学生物传感器检测TdT酶浓度的方法,其特征在于:利用循环伏安法,设置电位范围为-1.2 0 V,扫速为50 mV/s,检~测DNA-AgNCs/GO/GCE对不同浓度TdT酶的电化学响应,获得一系列不同浓度的TdT酶对应的还原峰电流大小,建立电流响应与TdT浓度之间的定量关系,根据两者之间的定量关系,确定待测样品中TdT酶的含量。