利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2022102324809
申请人: 重庆医科大学国际体外诊断研究院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的miRNA电化学传感器,其制备方法包括以下步骤:(1)、铈银纳米花的合成

将90mg BSA分散在20mL超纯水中,然后在室温条件下缓慢加入10mL AgNO3(10mM),持续‑1搅拌10分钟。充分混合后,逐滴加入1mL AA(50mg•mL ),溶液颜色逐渐变为浅灰色时提示反应完成。将上述所得产物用超纯水洗涤一次,随后重悬于1mL超纯水中。接下来,将1mL所得产物加入到19mL超纯水中。混合均匀后,加入5mL Ce(NO3)3(2.8mM)并在室温下搅拌10分钟。

随后,逐滴加入5mL NaOH(40mM),继续反应3‑5分钟。上述反应得到的铈银纳米花用超纯水洗涤3次。最后,将其重悬在1mL超纯水中,储存于4℃备用。

(2)、信号探针的制备

将1mL所得铈银纳米花溶液与1%的PEI混合,随后在室温下搅拌4小时,使得PEI能充分包裹在纳米材料上。所得产物通过离心富集,然后用超纯水洗涤以去除未结合的PEI。然后,将20μL SP(20μM)与NHS(10mM)、EDC(40mM)混合静置30分钟,以激活SP链上修饰的羧基基团。之后,将100μL包裹PEI的纳米材料与1μM激活SP混合并在4℃下持续搅拌12小时。最后,所得产物用超纯水洗涤3次,分散在1×TE缓冲液(pH 7.4)中。

(3)、分支DNAzyme步行器的构建

为确保发夹二级结构的稳定,在反应之前将每种探针在95℃加热5分钟,然后以0.1℃/s的速度缓慢冷却至12℃。退火过程后,HP1(100nM)、HP2(100nM)、HP3(200nM)和修饰底物链的磁珠在反应缓冲液(20mM Tris‑HCl,10mM MgCl2,10mM KCl,100mM NaCl,pH 7.4)中与不同浓度的靶标混合,在25℃下孵育90分钟以获得稳定的分支DNAzyme步行器。

(4)、MiRNA的检测

将10μL分支DNAzyme步行器产物和10μL构建好的信号探针先后滴加在电极上,分别在

37℃下孵育30分钟。孵育完成后,利用三电极系统在含有20mM H2O2的磷酸盐缓冲液(25mL)中进行测量,电压范围为‑0.2至0.6V。电压幅度为0.05V。

2.如权利要求1所述的基于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的miRNA电化学传感器,其制备方法步骤(1)中BSA的量为90mg,NaOH为5mL 40mM。

3.如权利要求1所述的基于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的miRNA电化学传感器,其制备方法步骤(2)中PEI为1%,NHS为10mM,EDC为40mM。

4.如权利要求1所述的基于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的miRNA电化学传感器,其制备方法步骤(3)中熵驱动HP1为100nM、HP2为100nM、HP3为200nM,是在25℃下反应90分钟。

5.如权利要求1所述的基于铈银纳米花和分支DNAzyme步行器的miRNA电化学传感器其制备方法步骤(4)中在37℃下反应30分钟。