1.基于纳米金标记和酪胺信号放大技术测定脱落酸的方法，其特征在于以纳米金为标记物和磁珠为载体，以酪胺信号放大技术和PIP-HRP-H2O2化学发光体系实现植物激素脱落酸的测定，测定步骤如下：(1)纳米金的制备：将用于制备纳米金的玻璃仪器及聚四氟乙烯搅拌棒用新制王水清洗，再用二次蒸馏水冲洗后烘干备用；再向500mL三口烧瓶中加入250mL水，再加入

2.5mL1％HAuCl4，在电炉上加热至沸腾后，快速加入4.4mL 1％柠檬酸钠；溶液颜色由淡黄色逐渐变为酒红色，然后继续保持沸10～15分钟，移走热源，在室温下继续搅拌至冷却，定容至200mL，置4℃冰箱冷藏备用；

(2)生物素化脱落酸抗体的制备：首先用1mol/L pH 9.2的NaHCO3溶液将脱落酸抗体稀释为1mg/mL；用DMF将Bio-NHS配制成50mg/mL的溶液；然后按Bio-HNS与脱落酸抗体质量比1:7的比例将其混合，室温下搅拌混匀反应4h，即得生物素化脱落酸抗体；

-7

(3)抗体修饰纳米金的制备：在2mL的小试管中加入150μL，10 M的巯基丙酸，再加入

1mL、0.1M的EDC，活化30分钟；另取一个5mL的小试管，加入2mL纳米金，1mL，0.1M，pH 6.8的咪唑缓冲液，活化30分钟；将上述两溶液混合反应12小时，离心分离，弃上清液，再用磷酸缓冲溶液洗三次，定容至2mL；然后将10μg生物素化IgG、3μg生物素化脱落酸抗体加入上述溶液中，混合反应12小时，得抗体修饰纳米金；

(4)抗体修饰磁珠的制备：取30μL磁珠于1.5mL小试管中，用200μL磷酸缓冲溶液洗涤三次，加入200μL，0.1M咪唑-HCl缓冲溶液和100μL 0.2M的EDC溶液，在37℃下反应40分钟；然后用200μL磷酸缓冲溶液洗涤三次，最后加入200μL磷酸缓冲溶液摇匀；再加入10μg脱落酸抗体，37℃孵育过夜；最后，用200μL磷酸缓冲溶液洗涤三次，磁性分离后，分散于200μL磷酸缓冲溶液中；再加入200μL 0.1g/mL的BSA，并置于37℃下反应40分钟，再用200μL磷酸缓冲溶液洗涤三次，磁性分离后，分散于200μL磷酸缓冲溶液中，得抗体修饰磁珠，4℃冰箱保存备用；

(5)生物素化酪胺的制备：分别取10.0mg Bio-NHS和酪胺-HCl，用DMF溶解，分别配制成10mg/mL的溶液；在配置的酪胺-HCl溶液中加入三乙胺10μL，室温放置4小时后取

17.3μL，与60.2μL的Bio-NHS溶液混合，室温反应4小时，即得生物素化酪胺，4℃冰箱保存备；

(6)脱落酸的测定：取不同量的脱落酸标准溶液或样品溶液加入抗体修饰磁珠溶液中，37℃下反应30分钟；然后加入抗体修饰纳米金，37℃下反应30分钟，磁性分离，并用磷酸缓冲溶液洗涤三次后分散于磷酸缓冲溶液中；然后加入生物素化酪胺溶液，再加入体积分数为0.5％的过氧化氢溶液，在37℃避光孵育30分钟，用含0.05％体积分数的吐温-20的磷酸缓冲液洗涤三次；然后再加入链霉亲和素-HRP，37℃孵育30分钟，用磷酸缓冲溶液洗涤三次后分散于磷酸缓冲溶液中；然后进行化学发光测定，根据标准溶液浓度和化学发光信号关系作图得标准曲线；根据所测定样品溶液的化学发光信号对样品中脱落酸含量进行定量；

(7)样品分析：将微纳米级微透析探针插入模式植物内部，对植物激素进行微透析无损伤原位、实时取样，在通道下游待测组分按步骤(6)方法进行实验，根据化学发光信号和步骤(6)所得标准曲线获取植物激素脱落酸的含量。

2.根据权利要求1测定脱落酸的方法，其特征在于所述化学试剂为分析纯试剂，所有溶液均用二次蒸馏水配置。

3.根据权利要求1测定脱落酸的方法，其特征在于所述磷酸缓冲液浓度为0.2M，pH 7.4，配制方法：取浓度为35.61g/L的Na2HPO4·2H2O溶液81mL，浓度为27.6g/L的NaH2PO4·H2O溶液19mL混合即得。

4.根据权利要求1的测定脱落酸的方法，其特征在于所述咪唑-HCl缓冲液配制方法：

取咪唑6.8g，氯化钠11.7g，加于500mL二次蒸馏水中，加0.1mol/L盐酸186mL，调pH至

6.8，最后加二次蒸馏水至1升。