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专利号: 2015108964245
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种产γ-环糊精糖基转移酶的重组大肠杆菌,其特征在于:在γ-环糊精糖基转移酶基因与T7启动子之间加入信号肽形成重组基因,将重组基因在宿主大肠杆菌中进行表达得到的重组大肠杆菌;

所述γ-环糊精糖基转移酶的核苷酸序列是SEQ ID NO.5;所述信号肽的核苷酸序列是SEQ ID NO.4。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述重组大肠杆菌的出发宿主菌是E.coli BL21(DE3)。

3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述信号肽的核苷酸序列SEQ ID NO.4由SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所代替。

4.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述将重组基因在宿主大肠杆菌中进行表达得到的重组大肠杆菌是指:将所述重组基因连接到表达质粒中形成重组质粒,再转化到宿主大肠杆菌中得到重组大肠杆菌。

5.根据权利要求4所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述表达质粒是:pET-20b(+)。

6.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于具体制备方法为:

(1)在SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的γ-环糊精糖基转移酶基因与T7启动子之间加入SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的PelB信号肽,形成重组基因,即pET-20b(+)/PelB-CGT,以其为模板,用序列SEQ ID NO.6所示引物对整个表达载体进行PCR;

(2)将PCR产物用EcoRⅤ、NdeⅠ双酶切得到不含信号肽的重组基因,即pET-20b(+)/CGT;

(3)根据SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的信号肽设计引物为SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列,进行PCR,所得产物用EcoRⅤ、NdeⅠ双酶切,得到SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的信号肽;

(4)用连接酶连接步骤(2)的重组基因和步骤(3)的SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的信号肽得到重组质粒,即pET-20b(+)/DacD-CGT;

(5)将步骤4得到的重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,即得到重组大肠杆菌。

7.一种权利要求1~6任一项所述的产γ-环糊精糖基转移酶的重组大肠杆菌的应用,其特征在于:所述重组大肠杆菌生产γ-环糊精糖基转移酶。