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专利号: 2015108154375
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种快速鉴定腌渍绵蜇的方法,其特征在于,具体步骤为:S1、将腌渍海蜇进行脱盐处理,6~18h换一次水,共换水3~8次,脱水后,将得到的海蜇贮存于终浓度为60~80v/v%乙醇溶液中,备存;

S2、取步骤S1备存的海蜇组织100~200mg,剪碎,5000~10000rpm离心5~20min,取离心沉淀用无尘纸吸尽水分后,采用DNA提取试剂盒提取海蜇基因组DNA;

S3、将步骤S2得到的基因组DNA采用16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增,产物于-20℃储存;

所述16S rRNA基因通用引物为16SF和16SR引物,所述16SF和16SR引物序列分别为:

16SF:5'-TCGACTGTTTACCAAAAACATAGC-3′,

16SR:5'-ACGGAATGAACTCAAATCATGTAAG-3′;

S4、步骤S3得到的PCR扩增产物分别采用HindⅢ、HpaⅠ、DraⅠ和XhoⅠ内切酶进行酶切处理,将得到的酶切产物用3w/v%琼脂糖凝胶电泳分离,成像检测,并将成像结果与已知绵蜇酶切产物的成像进行比对,进而实现快速鉴定腌渍绵蜇种属。

2.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法,其特征在于,步骤S1所述腌渍海蜇脱盐处理方式为12h换一次水,换4次;

所述乙醇溶液终浓度为70v/v%。

3.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法,其特征在于,步骤S2所述海蜇组织提取量为150mg。

4.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法,其特征在于,步骤S2所述DNA提取试剂盒为深加工食品DNA提取试剂盒。

5.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法,其特征在于,步骤S3所述PCR扩增反应体系中:每25μl反应体系,包括10×ExTaq Buffer 2.5μl,dNTP 2μl,ExTaq 0.125μl,16SF 

0.25μl,16SR 0.25μl,模板DNA 0.5μl,水19.375μl;

反应条件为94℃3min起始变性,94℃30s变性,60℃30s退火,72℃30s延伸,循环30次;

72℃10min进行最终延伸。

6.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法,其特征在于,步骤S4所述酶切处理,每30μl反应体系中,包含4μl步骤S3得到的PCR扩增产物,2μl 10×酶切缓冲液,1μl Hind Ⅲ、Hpa Ⅰ、Dra Ⅰ或Xho Ⅰ中的一种限制性内切酶,水余量;

反应条件为37℃反应1h。