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专利号: 2021112458650
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-01
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种牛MC1R基因型的鉴定方法,其特征在于:先通过牛MC1R基因的PCR扩增产物进行Sanger测序确定牛不同毛色的基因型;然后对牛MC1R基因编码区c.296T>C位点和c.310delG位点同时进行PCR扩增并结合高分辨率熔解曲线方法完成牛毛色基因型鉴定;

所述牛不同毛色的基因型采用c.296T>C位点和c.310delG位点组成的单倍型来定义,D D D + D具体为:黑毛纯合个体基因型EE(CG/CG),黑毛杂合个体基因型EE(CG/TG)和Ee(CG/T‑);

+

黄毛个体基因型Ee(TG/T‑)和ee(T‑/T‑);纯种本地黄牛基因型ee(T‑/T‑)。

2.如权利要求1所述的一种牛MC1R基因型的鉴定方法,其特征在于:牛MC1R基因的PCR扩增采用的引物为MC1R‑F:核苷酸序列如SEQ ID No.1所示, MC1R‑R:核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示。

3.如权利要求2所述的一种牛MC1R基因型的鉴定方法,其特征在于:所属牛MC1R基因的PCR扩增采用的反应体系优选为20μl:10μl 2xTaq PCR Master Mix,6.4μl ddH2O,所述上下游引物各0.8μl,DNA模板2μl;反应程序:95℃变性3min,95℃变性45s,60℃退火30s,72℃延伸90s,35个循环,72℃延伸10min。

4.如权利要求1所述的一种牛MC1R基因型的鉴定方法,其特征在于:所述对牛MC1R基因编码区c.296T>C位点和c.310delG位点同时进行PCR扩增过程采用的引物为HRM‑F:核苷酸序列如SEQ ID No.3所示,HRM‑R:核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

5.如权利要求4所述的一种牛MC1R基因型的鉴定方法,其特征在于:所述高分辨率熔解曲线方法具体是采用所述引物进行PCR扩增,并对PCR产物进行高分辨熔解曲线分析。

6.如权利要求5所述的一种牛MC1R基因型的鉴定方法,其特征在于:所述PCR扩增采用的反应体系为10μl:5μl Precision Melt Supermix,上下游引物各0.5μl,DNA模板4μl;其反应程序:95℃变性3min,95℃变性10s,60℃退火30s,40个循环。

7.如权利要求5所述的一种牛MC1R基因型的鉴定方法,其特征在于:所述对PCR产物进行高分辨熔解曲线分析的反应程序为95℃ 30s,随后从65℃开始每次10s,按0.2℃温度递增开始进行熔解曲线分析,温度递增到95℃完成熔解曲线分析。

8.采用如权利要求4所述牛MC1R基因型鉴定方法的试剂盒,其特征在于,该试剂盒原料包括:所述HRM引物,牛不同毛色基因型的标准品;所述牛不同毛色基因型的标准品为:黑毛D D D + D纯合个体基因型EE(CG/CG),黑毛杂合个体基因型EE(CG/TG)和Ee(CG/T‑);黄毛个体基+因型Ee(TG/T‑)和ee(T‑/T‑);纯种本地黄牛基因型ee(T‑/T‑)。