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专利号: 2025113097323
申请人: 重庆医科大学附属儿童医院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种靶向CD24的纳米药物递送系统,其特征在于,用抗CD24单链可变片段scFv修饰的基因工程膜EM‑CD24纳米外泌体包裹纳米粒子Cys‑hMnO2@GOx,构建方法为:将Cys‑hMnO2@GOx用去离子水分散,与CD24工程化外泌体EM‑CD24混合,混合物依次通过聚碳酸酯膜挤出

18‑22次,随后通过脂质体挤出器挤出8‑12次,得到纳米药物递送系统Cys‑hMnO2@GOx@EM‑CD24;

所述抗CD24单链可变片段scFv修饰的基因工程膜EM‑CD24纳米外泌体的构建方法为:用慢病毒载体编码糖基磷脂酰肌醇GPI锚定的抗CD24单链可变片段anti‑CD24 scFv转导HEK‑293T细胞,设计特异性引物,RT‑PCR分析证实该构建物在HEK293T细胞中成功表达HEK293T‑CD24,然后用脂质体挤出器挤压HEK293T‑CD24细胞后,生成EM‑CD24纳米外泌体;

所述Cys‑hMnO2@GOx的构建方法为:

将Cys‑hMnO2‑PEI分散液与葡萄糖氧化酶GOx在400‑600rpm振荡孵育50‑70分钟,再次通过离心清洗纯化,得到Cys‑hMnO2@GOx;

所述Cys‑hMnO2‑PEI分散液的构建方法为;

用去离子水洗涤Cys‑hMnO2至上清液pH值达到6.8‑7.2,将沉淀物重新悬浮于去离子水中,加入聚乙烯亚胺,在磁力搅拌下以400‑600 rpm孵育1‑3小时,然后离心得纳米粒子,去离子水清洗,重新悬浮于去离子水中得到Cys‑hMnO2‑PEI分散液;

所述特异性引物为:

Forward: 5′‑CTGAGCCTGAGCGTGACCATTG‑3′;

Reverse: 5′‑GGTAGGTCTTTCCATCGCTGTGC‑3′。

2.如权利要求1所述的靶向CD24的纳米药物递送系统,其特征在于,所述Cys‑hMnO2的构建方法为:将十六烷基三甲基溴化铵CTAB和L‑胱氨酸溶解在去离子水中,并将pH值调节至9‑10,然后加入三乙胺后在90‑100°C下磁力搅拌,再加入正硅酸四乙酯TEOS,继续搅拌3‑5小时,离心收集固体得Cys‑hSiO2纳米粒子,纯化后用去离子水溶解,加入高锰酸钾KMnO4,超声处理,在1000‑1500 rpm转速下连续磁力搅拌5‑7小时,产物用碳酸钠溶液回流处理2‑4小时,再用碳酸氢钠溶液回流处理9‑11小时,得到负载胱氨酸的中空二氧化锰纳米结构Cys‑hMnO2。

3.如权利要求1所述的靶向CD24的纳米药物递送系统,其特征在于,包括如下步骤:(1)Cys‑hMnO2的构建方法为:

将十六烷基三甲基溴化铵CTAB和L‑胱氨酸溶解在去离子水中,并将pH值调节至9‑10,然后加入三乙胺后在90‑100°C下磁力搅拌20‑40分钟,然后在持续搅拌下加入正硅酸四乙酯TEOS,继续搅拌3‑5小时,离心收集固体得Cys‑hSiO2纳米粒子,用乙醇清洗三次,随后用去离子水清洗,然后将纯化后的产物Cys‑hSiO2纳米粒子重新悬浮,并用去离子水溶解,然后加入高锰酸钾KMnO4,超声处理0.5‑1.5小时,随后在1000‑1500 rpm转速下连续磁力搅拌

5‑7小时,将产物在50‑70°C下用碳酸钠溶液回流处理2‑4小时,随后在碳酸氢钠溶液中二次回流处理9‑11小时以蚀刻二氧化硅模板,得到负载胱氨酸的中空二氧化锰纳米结构Cys‑hMnO2;

(2)Cys‑hMnO2‑PEI分散液的构建方法为;

用去离子水洗涤Cys‑hMnO2至上清液pH值达到6.8‑7.2,将沉淀物重新悬浮于去离子水中,加入聚乙烯亚胺,在磁力搅拌下以400‑600 rpm孵育1‑3小时,然后离心得纳米粒子,去离子水清洗,重新悬浮于去离子水中得到PEI功能化的Cys‑hMnO2‑PEI分散液;

(3)Cys‑hMnO2@GOx的构建方法为:

将Cys‑hMnO2‑PEI分散液与葡萄糖氧化酶GOx在400‑600rpm振荡孵育50‑70分钟,再次通过离心清洗纯化,得到Cys‑hMnO2@GOx;

(4)所述抗CD24单链可变片段scFv修饰的基因工程膜EM‑CD24纳米外泌体的构建方法为:用慢病毒载体编码糖基磷脂酰肌醇GPI锚定的抗CD24单链可变片段anti‑CD24 scFv转导HEK‑293T细胞,设计特异性引物,RT‑PCR分析证实该构建物在HEK293T细胞中成功表达HEK293T‑CD24,然后用脂质体挤出器挤压HEK293T‑CD24细胞后,生成EM‑CD24纳米外泌体;

(5)Cys‑hMnO2@GOx@EM‑CD24的构建方法为:

将Cys‑hMnO2@GOx用去离子水分散,与CD24工程化外泌体EM‑CD24混合,混合物依次通过聚碳酸酯膜挤出18‑22次,随后通过脂质体挤出器挤出8‑12次,得到Cys‑hMnO2@GOx@EM‑CD24。

4.如权利要求1‑3任一项所述的靶向CD24的纳米药物递送系统,其特征在于,所述聚碳酸酯膜孔径400 nm。

5.如权利要求1‑3任一项所述的靶向CD24的纳米药物递送系统,其特征在于,所述脂质体挤出器孔径200 nm。

6.如权利要求1‑5任一项所述的靶向CD24的纳米药物递送系统在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述肿瘤为神经母细胞瘤。