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专利号: 2025107361117
申请人: 安徽医科大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-09-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种虫草素纳米递送体的制备方法,其特征在于,利用滚环扩增技术,将虫草素通过碱基互补配对连接在环状DNA上,得到虫草素纳米递送体,包括以下步骤:S1.制备环状DNA:将引物链溶液与模板链溶液按照摩尔比(2 4):1混合,加入5 μL 10~×连接缓冲液,补加双蒸水至终体积为50 μL后,使用PCR仪完成退火;所述退火程序为:95℃反应2 min,65℃反应30 min,50℃反应30 min,37℃反应30 min,22℃反应30 min;退火后,继续加入T4连接酶,25℃静置3 h进行连接,然后65℃下保温10 min终止反应,得到环状DNA产物,所述引物链的序列如SEQ ID No:1所示,所述模板链的序列如SEQ ID No:2所示,S2.滚环扩增:将制备的环状DNA与虫草素溶液混合并制备滚环扩增反应体系,滚环扩增反应体系包括环状DNA、虫草素溶液、Φ29 DNA 聚合酶、dNTP、BSA、Φ29DNA聚合酶反应缓冲液,其中,虫草素的终浓度为10‑16 mM,Φ29 DNA 聚合酶的终浓度为2 3 U/μL,dNTP的终~浓度为1 2 mM/μL ;PCR仪30℃反应10 60 min,然后在75℃下保温10 min终止反应,得到所~ ~需的虫草素纳米递送体。

2.如权利要求1所述的一种虫草素纳米递送体的制备方法,其特征在于,所述引物链溶液与模板链溶液按照浓度比2:1混合。

3.如权利要求1所述的一种虫草素纳米递送体的制备方法,其特征在于,所述T4连接酶的用量为10 20 U/ μL。

~

4.如权利要求3所述的一种虫草素纳米递送体的制备方法,其特征在于,所述T4连接酶的用量为10 U/ μL。

5.如权利要求1所述的一种虫草素纳米递送体的制备方法,其特征在于,所述滚环扩增反应体系中,虫草素的终浓度为16mM,Φ29DNA聚合酶的终浓度为2U/μL, dNTP的终浓度为

2mM/μL。

6.一种虫草素纳米递送体,其特征在于,使用如权利要求1‑5中任意一项所述的制备方法制备得到。

7.如权利要求6所述的一种虫草素纳米递送体,其特征在于,所述虫草素纳米递送体为纳米颗粒,粒径在100‑120 nm。

8.如权利要求6或7所述的虫草素纳米递送体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。