1.高产金黄霉素A的链霉菌(Streptomyces sp.)891‑DC,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO: M 20241963,保藏日期为2024年09月13日,保藏地址为中国武汉,武汉大学,邮编430072。
2.一种权利要求1所述链霉菌891‑DC的构建方法,所述方法包括如下步骤:
(1)使用CRISPR‑Cas9基因编辑技术,对链霉菌891中与金黄霉素生物合成基因簇同类型簇Cluster 22进行敲除并原位插入一个attB位点,构建含attB序列质粒载体pCRI‑22;所述attB位点核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;
(2)利用Red αβ同源重组技术在金黄霉素生物合成基因簇前添加启动子gapdh,得到重组质粒p15A‑chry‑gapdh‑phiC31;所述启动子gapdh核苷酸序列如SEQ ID NO.1中41‑325 bp所示;金黄霉素生物合成基因簇chry核苷酸序列如NCBI Seq:CP050693.1中6545734‑
6574668 bp所示;
(3)将步骤(1)中获得的质粒通过电转导入E. coli ET12567/pUZ8002中;
(4)通过接合转移将步骤(3)提取的质粒导入至链霉菌891基因组中,获得含一个attB位点的工程菌株;
(5)在整合酶作用下通过接合转移将步骤(2)中的质粒导入至步骤(4)含一个attB位点的工程菌株的基因组中,获得链霉菌891‑DC。
3.一种权利要求1所述链霉菌891‑DC在发酵生产金黄霉素A中的应用。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述应用的方法为:将所述链霉菌891‑DC接种至发酵培养基,28℃、220 rpm条件下至少培养13天,获得含金黄霉素A的发酵液;所述发酵培养基的组成为:5.0 g/L淀粉,20.0 g/L葡萄糖,10.0 g/L大豆粉,2.0 g/L碳酸钙,pH自然。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述链霉菌891‑DC接种至发酵培养基前先进行种子扩大培养,再将种子液以体积浓度5%的接种量接种至发酵培养基,所述种子扩大培养步骤:将链霉菌891‑DC接入含50 µg/mL安普霉素的MS琼脂培养基,28℃活化5‑6 d,然后接种到含有50 µg/mL安普霉素的ISP2液体培养基,28℃、220 rpm培养48~72 h后,获得种子液;所述MS琼脂培养基的组成为:20.0 g/L甘露醇,25.0 g/L熟黄豆粉,20.0 g/L琼脂,pH自然;ISP2液体培养基的组成为:4.0 g/L葡萄糖,4.0 g/L酵母提取物,10 g/L麦芽提取物,pH自然。