1.一种产两性霉素B的重组结节链霉菌( Streptomyces nodosus ) ,由保藏编号为CCTCC NO:M 2017426的结节链霉菌ZJB2016050基因敲除SEQ ID NO.1所示的PKS5基因簇获得。
2.权利要求1所述的重组结节链霉菌在微生物发酵制备两性霉素B中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述产两性霉素B的重组结节链霉菌接种至发酵培养基,25 30℃、200 500rpm发酵培养,获得含两性霉素B的发酵液,将~ ~
发酵液分离纯化,得到所述两性霉素B;所述发酵培养基终浓度组成为:葡萄糖60 80 g/L,~
牛肉膏5~10 g/L,大豆蛋白粉5~10 g/L,棉子粉8~12 g/L,CaCO3 5~10 g/L,KH2PO4 0.1~0.4 g/L,溶剂为水,pH 7.0。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵培养在发酵罐中进行,发酵罐压力
0.05 MPa,通气比0.08 1.5 vvm。
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5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述产两性霉素B的重组结节链霉菌在发酵培养前先进行种子培养,再将种子液以体积浓度2 10%的接种量接种至发酵培养基,所述种子~
培养为:将产两性霉素B的重组结节链霉菌接种至GYM平板,28℃培养7天,取颜色发灰黑色的孢子,使用棉花棒将表面孢子洗脱至无菌水中,将洗下的孢子悬液用含有棉花的注射器过滤,12000 rpm离心5 min后去上清液,沉淀加入无菌水重悬后,12000 rpm离心5 min重新洗脱一次,用无菌水重悬作为孢子悬液,将孢子悬液接种至种子培养基中,28 ℃,220 rpm 培养46 h,获得种子液;所述GYM平板终浓度组成为:葡萄糖4 g/L,酵母粉4 g/L,麦芽提取物10 g/L,碳酸钙2 g/L,琼脂18 g/L,溶剂为水,pH7.2;所述种子液培养基终浓度组成为:蛋白胨10~20 g/L,NaCl 5~10 g/L ,葡萄糖10~15 g/L,酵母粉5~10 g/L,CaCO3 0.5~1 g/L,溶剂为水,pH 7.0。