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专利号: 2019104512586
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种产两性霉素B的重组结节链霉菌(Streptomyces nodosus),其特征在于,所述重组结节链霉菌由保藏编号:CCTCC NO:M 2017426的结节链霉菌ZJB2016050敲除SEQ ID NO.6所示的PKS5基因簇后,再导入SEQ ID NO.1所示乙酰辅酶A羧化酶1基因、SEQ ID NO.2所示乙酰辅酶A羧化酶2基因、SEQ ID NO.3所示聚酮合酶PKSamphA基因、SEQ ID NO.4所示甲基丙二酰辅酶A变位酶基因和SEQ ID NO.5所示甲基丙二酰辅酶A异构酶基因的串联基因获得。

2.权利要求1所述的重组结节链霉菌在微生物发酵制备两性霉素B中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述产两性霉素B的重组结节链霉菌接种至发酵培养基,25~30℃、200~500rpm发酵培养,获得含两性霉素B的发酵液,将发酵液分离纯化,得到所述两性霉素B;所述发酵培养基终浓度组成为:葡萄糖60~80g/L,牛肉膏5~10g/L,大豆蛋白粉5~10g/L,棉子粉8~12g/L,CaCO3 5~10g/L,KH2PO4 0.1~

0.4g/L,溶剂为水,pH 7.0。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵培养在发酵罐中进行,发酵罐压力

0.05MPa,通气比0.08~1.5vvm。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述产两性霉素B的重组结节链霉菌在发酵培养前先进行种子培养,再将种子液以体积浓度2~10%的接种量接种至发酵培养基,所述种子培养为:将产两性霉素B的重组结节链霉菌接种至GYM平板,28℃培养7天,取颜色发灰黑色的孢子,使用棉花棒将表面孢子洗脱至无菌水中,将洗下的孢子悬液用含有棉花的注射器过滤,12000rpm离心5min后去上清液,沉淀加入无菌水重悬后,12000rpm离心5min重新洗脱一次,用无菌水重悬作为孢子悬液,将孢子悬液接种至种子培养基中,28℃,220rpm培养

46h,获得种子液;所述GYM平板终浓度组成为:葡萄糖4g/L,酵母粉4g/L,麦芽提取物10g/L,碳酸钙2g/L,琼脂18g/L,溶剂为水,pH7.2;所述种子液培养基终浓度组成为:蛋白胨10~

20g/L,NaCl 5~10g/L,葡萄糖10~15g/L,酵母粉5~10g/L,CaCO3 0.5~1g/L,溶剂为水,pH 7.0。