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专利号: 2024116908246
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种腈水解酶突变体,其特征在于,所述腈水解酶突变体是将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列突变为下列之一:(1)第59位的色氨酸突变为丙氨酸;(2)第134位苏氨酸突变为甘氨酸;(3)第135位组氨酸突变为亮氨酸;(4)第192位丝氨酸突变为甘氨酸;(5)双突变组合:第59位的色氨酸突变为丙氨酸、第134位苏氨酸突变为甘氨酸;(6)三突变组合:第59位的色氨酸突变为丙氨酸、第134位苏氨酸突变为甘氨酸、第135位组氨酸突变为亮氨酸;(7)将(1)~(4)所述的单点突变进行四突变组合。

2.如权利要求1所述的腈水解酶突变体,其特征在于,腈水解酶四突变突变体氨基酸序列为SEQ ID No.12所示。

3.一种权利要求1所述腈水解酶突变体的编码基因构建的重组基因工程菌。

4.一种权利要求1所述腈水解酶突变体在催化3,4,5,6‑四氯吡啶‑2‑甲腈合成3,4,5,

6‑四氯吡啶‑2‑羧酸中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的应用为:以表达腈水解酶突变体的基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体、或者湿菌体超声破碎后提取的粗酶液、或者粗酶液经过纯化得到的纯酶液,或者湿菌体固定化于硅藻土上得到的固定化细胞为催化剂,以3,4,

5,6‑四氯吡啶‑2‑甲腈为底物,以pH=4.0‑10.5,200mM缓冲液为反应介质构成反应体系,在

800rpm、35‑50℃恒温条件下反应完全后,离心后分离纯化,获得3,4,5,6‑四氯吡啶‑2‑羧酸。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述反应体系中,底物加入浓度20~200mM;

所述催化剂为粗酶液或纯酶液时,加入量以蛋白含量计为0.1‑3.5g/L;所述催化剂为湿菌体时,加入量以菌体湿重计为10‑100g/L;所述催化剂为固定化细胞时以湿菌体重量计加入量为10‑200g/L。

7.一种权利要求1所述腈水解酶突变体降解蓖麻粕中蓖麻碱的应用。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的应用为:以表达腈水解酶突变体的基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体、或者湿菌体超声破碎后提取的粗酶液或纯酶液为催化剂,以含有蓖麻碱的蓖麻粕为底物,以水或pH4.0‑10.5缓冲液为反应介质构成反应体系,在

300rpm、30‑50℃条件下反应至蓖麻粕中的蓖麻碱含量<10ppm,获得毒性降低的蓖麻粕。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述反应体系中,反应介质的加入量以蓖麻粕质量计为10~400mL/kg;所述催化剂加入量以菌体湿重计,湿菌体加入量以蓖麻粕质量计为1‑10g/kg。