1.一种酪氨酸解氨酶,其特征在于,来源于变色栓菌Trametes versicolor,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,对目的基因进行密码子优化,优化后的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的一种酪氨酸解氨酶,其特征在于,该酶很高的催化效率,适宜反应温度为45~65℃,适宜反应pH为9.0~11.0。
3.一种如权利要求1‑2中任意一项所述的酪氨酸解氨酶的应用,其特征在于,所述应用为酪氨酸解氨酶催化底物L‑酪氨酸发生脱氨反应生成对香豆酸。
4.根据权利要求3所述一种酪氨酸解氨酶的应用,其特征在于,所述应用方法包括以下步骤:(1)重组大肠杆菌构建:将SEQ ID NO.2所示基因编码序列克隆至表达载体pET28a(+)中,将其转入Escherichia coli BL21进行异源表达;
(2)发酵培养:挑取单菌落,接种至5mL LB试管过夜培养,以2%的接种量转接至含硫酸卡那霉素50μg/mL的TB培养基,37℃培养3h加诱导剂IPTG至终浓度为0.2mmol/L,18℃低温继续培养20小时,结束发酵,7000rpm,4℃离心10min,收集菌体备用;
(3)对香豆酸的合成:将发酵得到的湿菌体通过全细胞催化法生产对香豆酸。
5.根据权利要求4所述一种酪氨酸解氨酶的应用,其特征在于,所述步骤(3):全细胞催化法生产对香豆酸方法如下:将发酵得到的湿菌体、底物L‑酪氨酸组成转化体系,反应得到对香豆酸。
6.根据权利要求5所述一种酪氨酸解氨酶的应用,其特征在于,所述转化体系中底物L‑酪氨酸的的初始浓度为100g/L,重组大肠杆菌加菌量为4%,反应温度范围为45~55℃,通过流加氢氧化钠溶液控制反应pH范围9.0~11.0。