1.一种检测缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)的方法,具体包括如下步骤:(1)以僵蚕中球孢白僵菌的基因组DNA(gDNA)为模板,应用针对过敏原基因Bb‑f2 ORF的引物对进行PCR扩增;所述引物对为序列如SEQ ID NO.14所示的上游引物F1和如SEQ ID NO.15所示的下游引物R1;
(2)检测步骤(1)的扩增产物在750pb‑1000pb之间是否有扩增产物,没有即为缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌;
所述缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌为球孢白僵菌菌株△Bb‑f2,保藏号为CCTCC M 20231265,保藏单位为中国典型培养物保藏中心;
所述过敏原基因Bb‑f2 ORF的序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的方法,所述步骤(1)的PCR扩增中,25.0μL扩增反应体系包括:
2+
gDNA 2.0μL,含2 mM Mg 的LA Buffer 2.5μL,10 U浓度的LA Taq聚合酶0.25μL,2.5mM的dNTP 2.0μL,10mM的上游引物F1 1μL,10mM的下游引物R1 1μL,ddH2O余量。
3. 如权利要求2所述的方法,所述步骤(1)中PCR 扩增程序:95℃预变性3 min;95℃变性15s,56℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环;最后72℃延伸5 min。
4. 如权利要求3所述的方法,所述步骤(2)中检测扩增产物的方法为琼脂糖凝胶电泳法,检测电泳后的PCR产物在842pb是否有条带,没有显示条带即为缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌。
5. 一种通过表达量检测缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌的方法,具体包括如下步骤:(1)以僵蚕中球孢白僵菌株cDNA为模板,应用球孢白僵菌过敏原基因Bb‑f2 ORF片段的q‑PCR引物对进行荧光定量q‑PCR扩增;所述引物对为序列如SEQ ID NO.16所示的上游引物F2,和序列如SEQ ID NO.17所示的下游引物R2;
(2)以球孢白僵菌株的Actin基因为内参,采用引物对对菌株cDNA荧光定量q‑PCR扩增,所述引物对为序列如SEQ ID NO.18所示的上游引物Actin‑F和序列如SEQ ID NO.19所示的下游引物Actin‑R;以Actin基因表达量为参照计算过敏原基因Bb‑f2的相对表达量,相对表达量≤0.02即为缺失过敏源基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌;
所述缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌为球孢白僵菌菌株△Bb‑f2,保藏号为CCTCC M 20231265,保藏单位为中国典型培养物保藏中心;
所述过敏原基因Bb‑f2 ORF的序列如SEQ ID NO.1所示。
6. 如权利要求5所述的方法,所述实时荧光定量q‑PCR的20μL反应体系如下:100 ng cDNA, 200 nM上游引物F2,200 nM下游引物F2及10 μL 2×iQTMSYBR® Green Super mix。
7. 如权利要求6所述的方法,所述q‑PCR 扩增程序:95℃预变性10 min;95℃变性15s,
60℃退火1min,95℃延伸15 s,然后重复退火和延伸相同时间一次,预设定15‑35个循环。
8. 一种鉴定缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌的方法,具体包括如下步骤:(1)以僵蚕菌株基因组DNA(gDNA)为模板,应用球孢白僵菌过敏原基因Bb‑f2 ORF片段的q‑PCR引物对,所述引物对为序列如SEQ ID NO.16所示的上游引物F2和序列如SEQ ID NO.17所示的下游引物R2组成,进行荧光定量q‑PCR扩增;
(2)读取不同菌株gDNA的q‑PCR荧光的CT值;CT值超过30即为缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌;
所述缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌为球孢白僵菌菌株△Bb‑f2,保藏号为CCTCC M 20231265,保藏单位为中国典型培养物保藏中心;
所述球孢白僵菌过敏原基因Bb‑f2 ORF的序列如SEQ ID NO.1所示。
9. 一种缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌菌株△Bb‑f2,保藏号为CCTCC M
20231265,保藏单位为中国典型培养物保藏中心。
10. 一种权利要求9所述的缺失过敏原基因Bb‑f2 ORF的球孢白僵菌菌株在养殖生产僵蚕中应用。