1.一种产卵孢素球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株,其特征在于,为ΔBbbgli1‑OEops3 菌株,该菌株由超表达ops3基因后,再敲除Bbbgli1基因得到的;
OE
所述ΔBbbgli1‑ops3 菌株采用如下方法获得:
以球孢白僵菌基因组作模板扩增得到ops3基因,并将其克隆进pk2‑bar载体的组成型启动子PgpdA下,得pk2‑bar‑ops3;
具体包括:用引物p62794‑O1为5’‑GCTCTAGAATGTTTTACACTTTCAATGCTG‑3’和p62794‑O2为5’‑ GCTCTAGATCAAAACGAATATAATTCGGAA‑3’,从基因组模板上扩增获得ops3片段,用限制性内切酶XbaI消化目标片段,回收后克隆进pK2‑PgpdA中的XbaI位点;用pgpdA‑1为5’‑ACGCACCAGAGCTTCGTAGT‑3’和p62794‑O2扩增并筛选出方向正确的pK2‑bar‑gpdA‑ops3载体,测序验证;
2)将pk2‑bar‑ops3转入根癌农杆菌LBA4404后,利用根癌农杆菌介导球孢白僵菌的遗OE传转化,并经PCR筛选获得超量表达ops3的ops3 菌株;
3)以球孢白僵菌基因组作模板扩增得到Bbbgli1基因的左臂Bbbgli1L和右臂Bbbgli1R,分别构建进pk2‑sur载体,得敲除载体pk2‑sur‑ Bbbgli1L‑bar‑ Bbbgli1R;
具体为:以球孢白僵菌基因组为模板,分别利用引物对PBbbgli1LB1/PBbbgli1LB2、PBbbgli1RB1/PBbbgli1RB2扩增Bbbgli1基因的上下游序列,利用Vazyme公司的同源重组酶ClonExpress将其克隆进pK2‑sur的EcoRI/XbaI位点,获得所述敲除载体;
其中,PBbbgli1LB1为5’‑tatgaccatgattacgaattccgtcgcgtgtatgctgaaag,PBbbgli1LB2为tctgtcgacactagtgaattcgtggactgcaatgggtgaga‑3’,PBbbgli1RB1为5’gaggtaatccttctttctagacaaggtgtcattgccagcac,PBbbgli1RB2为tgcctgcaggtcgactctagatacacacaactcccaccagc‑3’;
4)将pk2‑sur‑ Bbbgli1L‑bar‑ Bbbgli1R转入根癌农杆菌LBA4404后,利用根癌农杆菌OE介导法将pk2‑sur‑ Bbbgli1L‑bar‑ Bbbgli1R转入ops3 菌株,并经PCR筛选获得DBbbgli1‑OEops3 菌株。
2.如权利要求1所述产卵孢素球孢白僵菌菌株在CZB中合成卵孢素的应用,其特征在于,用于在CZB培养基中大量合成卵孢素。
3.一种采用权利要求1所述产卵孢素球孢白僵菌菌株在CZB中合成卵孢素的方法,其特征在于,具体步骤包括:OE
1)将ΔBbbgli1‑ops3 表达菌株接种到CZB培养基中于26 ℃摇床上培养5 d;
2)离心后将上清液用等体积的乙酸乙酯进行萃取,过夜;
3)收集乙酸乙酯相和水相,分别经旋转蒸发仪蒸干后,用100%甲醇溶解后离心,得到的上清液即为卵孢素。