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专利号: 2023103508768
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.BdorOBP28a‑2蛋白在马拉硫磷含量检测中的应用,其特征在于:用多个已知浓度的马拉硫磷标准品,检测BdorOBP28a‑2蛋白与标准品的亲和力,以马拉硫磷浓度为横坐标、亲和力检测荧光值为纵坐标拟合出亲和曲线,检测含有马拉硫磷的待测品与BdorOBP28a‑2蛋白的亲和力,根据标准品的亲和曲线,得到待测样品的马拉硫磷浓度;所述BdorOBP28a‑2蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示;待测样品的马拉硫磷浓度在305nM~

1.25mM之间。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:采用微量热涌动技术检测BdorOBP28a‑2蛋白与马拉硫磷样品的亲和力。

3.检测桔小实蝇对马拉硫磷抗性的分子标记的基因表达量的试剂在桔小实蝇对马拉硫磷敏感种群和抗性种群分类中的应用,所述分子标记为桔小实蝇气味结合蛋白的编码基因BdorOBP28a‑2基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:以桔小实蝇马拉硫磷敏感种群为对照,检测待测桔小实蝇的BdorOBP28a‑2基因的表达量,如果待测桔小实蝇的BdorOBP28a‑2基因表达量显著高于敏感种群,即可判断为待测桔小实蝇为对马拉硫磷的抗性种群;如果待测桔小实蝇和敏感种群的BdorOBP28a‑2基因表达量无显著差异,则不能判断为待测桔小实蝇为对马拉硫磷的抗性种群。

5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:包括如下步骤:提取待测桔小实蝇的总RNA,反转为cDNA,以cDNA为模板,用引物对进行qPCR扩增,以桔小实蝇马拉硫磷敏感种群为对照,测定待测对象中的BdorOBP28a‑2基因的表达量,当待测对象的BdorOBP28a‑2基因表达量显著高于敏感种群,即可判断待测桔小实蝇为对马拉硫磷的抗性种群;所述引物对的引物序列为:上游引物:OBP28a‑2 qPCR F:5’‑GGTGCTGCTGACTCTGACAT‑3’,

下游引物:OBP28a‑2 qPCR R:5’‑GCCTCGCAATGATCATCTGG‑3’。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:qPCR扩增反应体系是:NovoStart SYBR qPCR SuperMix Plus 5.0 μL,10 μM的上/下游引物各0.3 μL,cDNA模板 0.5 μL,无核酶水补至10 μL;qPCR扩增条件是:95℃预变性2 min;95℃变性30 s,60℃退火延伸30 s,40个循环;60℃ 30 s,95℃ 15 s形成熔解曲线。