1.一种靶向荧光探针分子,其特征在于,所述靶向荧光探针分子为P1或P2,其结构式分别如下所示:
其中,P1中n1表示碳链中碳的数量,1≤n1≤20;P2中n2表示乙二醇PEG的数量,1≤n2≤
15。
2.根据权利要求1所述的一种靶向荧光探针分子,其特征在于,所述靶向荧光探针分子P1或P2在激发波长492±30nm,吸收波长518±30nm处具有荧光吸收;所述靶向荧光探针分子P1或P2以共价结合方式结合在蛋白裸露的半胱氨酸上来标记蛋白。
3.根据权利要求2所述的一种靶向荧光探针分子,其特征在于,所述共价结合方式为靶向荧光探针分子P1或P2中的末端双键通过迈克尔加成反应结合在半胱氨酸的巯基上。
4.根据权利要求1或2所述的一种靶向荧光探针分子的合成方法,其特征在于,所述靶向荧光探针分子P1或P2的合成方法,具体包括如下步骤:所述靶向荧光探针分子P1的合成方法:
取0.2g,1.12mmol的化合物1与0.2g,1.12mmol的化合物2加入四氢呋喃和H2O中,加入
0.13g,1.12mmol的锌粉,室温下搅拌过夜,TLC检测反应完全;加入20mL水,乙酸乙酯萃取,旋干得化合物3;将化合物3粗产品溶于20mL二氯甲烷中,加入0.2g,1.12mmol的对甲苯磺酸,室温下搅拌1h,TLC检测反应完成,加入20mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应,二氯甲烷萃取,乙酸乙酯萃取,旋干柱层析得到0.23g,0.97mmol的化合物4;化合物4溶于20mL四氢呋喃中,冰浴下滴加2.0M,1.5mL的硼烷‑二甲硫醚溶液,搅拌2h后,缓慢加入0.5mL水,再加入
0.45g,2.95mmol的过硼酸钠,搅拌2h后,硅藻土抽滤,柱层析得到0.1g,0.39mmol的化合物
5;化合物6和咪唑按1:1摩尔比例溶解于2mL二氯甲烷中,然后在冰浴中加入等比例叔丁基二甲基氯硅烷,搅拌反应10min,反应物用水洗,粗提物用硅胶纯化得到化合物7;化合物5、化合物7、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和4‑二甲氨基吡啶按1:1.2:2:0.5反应比溶解于二氯甲烷中,室温搅拌反应20h,反应液加盐酸水溶液洗涤,用氯仿萃取,氯仿部位浓缩后用硅胶柱分离得化合物8;化合物8溶解于四氢呋喃,加入1.2:2.0比例的四丁基氟化铵和乙酸,室温搅拌过夜,然后用硅胶柱进行纯化等目标化合物P1,收率为70%;其中,所述化合物1‑8的化学式结构式分别为:所述靶向荧光探针分子P2的合成方法:
取0.9g的化合物9与0.9g的三乙胺溶于10mL二氯甲烷中,内温0度滴加0.36g的丙烯酰氯,用100ml二氯甲烷稀释,5%柠檬酸洗,饱和食盐水洗,干燥旋干过柱得0.6g淡黄色油状化合物10;0.6g的化合物10溶于二氯甲烷中,通氯化氢气体,反应完后旋干得0.6g的化合物
11,0.6g的化合物11溶于二甲基甲酰胺中,加入三乙胺,20min后加入0.76g的化合物12,反应完后旋干二甲基甲酰胺,拌样过柱得0.5g的目标化合物P2;
其中,所述化合物9‑12的化学结构式分别为:
5.根据权利要求1或2所述的一种靶向荧光探针分子的应用,其特征在于,所述靶向荧光探针分子P1或P2用于靶向药物筛选的试剂盒,所述靶向药物筛选的试剂盒由靶标蛋白、靶向荧光探针分子P1或P2、测试缓冲液及阳性药物分子组成。
6.根据权利要求5所述的一种靶向荧光探针分子的应用,其特征在于,所述测试缓冲液由蛋白缓冲液加1mM的还原剂配置而得,所述还原剂包含但不限于二硫苏糖醇或β巯基乙醇;所述靶向荧光探针分子P1或P2和阳性药物分子以1mM/L的浓度溶解于二甲基亚砜中。
7.根据权利要求5所述的一种靶向荧光探针分子的应用,其特征在于,所述靶标蛋白为活性位点包含半胱氨酸的疾病靶标。
8.根据权利要求7所述的一种靶向荧光探针分子的应用,其特征在于,所述疾病靶标为癌症靶标KRAS G12C、结核杆菌药物靶标Ldtmt2、新冠病毒药物靶标Mpro、抗癌药物靶标EGFR外显子20插入突变体、炎症药物靶标Ubc13、抗癌药物靶标Pin1、白血病药物靶标Menin‑MLL、抗癌药物靶标FGFR4、抗癌药物靶标SMYD3、自身免疫药物靶标BTK或抗癌药物靶标DCN1‑UBC12。
9.根据权利要求5所述的一种靶向荧光探针分子的应用,其特征在于,所述试剂盒的药物筛选方法,具体包括如下步骤:阳性对照组:测试缓冲液+等体积靶标蛋白+等比例靶向荧光探针分子P1或P2;阴性对照组:测试缓冲液+等比例靶向荧光探针分子P1或P2;阳性药物组:测试缓冲液+等体积靶标蛋白+等比例阳性药物分子+等比例靶向荧光探针分子P1或P2;药物筛选组:测试缓冲液+等体积靶标蛋白+等比例待筛选药物+等比例靶向荧光探针分子P1或P2;加入待筛选药物后先孵育30min,然后再加入靶向荧光探针分子P1或P2孵育30min,最后在激发波长492nm,吸收波长518nm处检测荧光偏振值;药物的抑制率=[mP(药物筛选组)‑mP(阴性对照组)]÷[mP(阳性对照组)‑mP(阴性对照组)]×100%。