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专利号: 2023101731268
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株,其特征在于,在牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2的基础上,缺失基因组中889,890,891,892,893和894基因;

889基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;

890基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;

891基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;

892基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;

893基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示;

894基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

2.权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:以牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2的基因组DNA为模板,分别以引物Pm889‑894U‑F/Pm889‑894U‑R扩增Pm889‑894基因的上游同源臂,用引物Pm889‑894D‑F/Pm889‑894D‑R扩增Pm889‑894基因的下游同源臂;

将所述Pm889‑894基因的上游同源臂和扩增Pm889‑894基因的下游同源臂克隆至RpUC19oriKan质粒中,得到缺失基因重组质粒pUC19oriKanR∆889‑894;

将所述缺失基因重组质粒pUC19oriKanR∆889‑894转化入PmCQ2感受态细胞中,筛选得到PmCQ2∆889‑894;

所述引物Pm889‑894U‑F/Pm889‑894U‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示;

所述引物Pm889‑894D‑F/Pm889‑894D‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示。

3.根据权利要求2所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株的构建方法,其R特征在于,所述克隆的方法为将pUC19oriKan质粒分别用Hind Ⅲ和BamHⅠ限制性内切酶酶切,将Pm889‑894基因的上游同源臂和扩增Pm889‑894基因的下游同源臂连接至酶切后的RpUC19oriKan质粒中,得到缺失基因重组质粒pUC19oriKanR∆889‑894。

4.根据权利要求2或3所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株的构建方法,其特征在于,所述转化的方法包括电转化;

所述电转化的电击电压为2500V,电阻500欧,所述电转化的时间为5ms。

5.权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株或权利要求2 4任意~一项所述构建方法得到的牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株在制备广谱多杀性巴氏杆菌疫苗中的应用。

6.根据权利要求5所述应用,其特征在于,广谱多杀性巴氏杆菌疫苗包括A型多杀性巴氏杆菌疫苗、B型多杀性巴氏杆菌疫苗和F型多杀性巴氏杆菌疫苗。

7.一种广谱多杀性巴氏杆菌疫苗,其特征在于,包括佐剂和权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株或权利要求2 4任意一项所述构建方法得到的牛源A~型多杀性巴氏杆菌PmCQ2∆889‑894减毒株。