1.一种牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株在制备促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护的疫苗中的应用，其特征在于，采用牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株制成疫苗，用于免疫接种，促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护；

所述牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株，为PmCQ2菌株的 hyaD 基因的缺失株，所述基因缺失株PmCQ2Δ hyaD 保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC  M 

2022067；或者所述牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株，为PmCQ2菌株的 qseC 基因的缺失株，所述缺失株PmCQ2Δ qseC 保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 

2022066；

所述交叉免疫保护是对牛源A型、B型、F型多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护；

或所述交叉免疫保护是对猪源、禽源、兔源A型多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护。

2.根据权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株在制备促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护的疫苗中的应用，其特征在于，所述 hyaD 基因缺失部分的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，该核苷酸片段缺失导致了hyaD基因功能的失活。

3.根据权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株在制备促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护的疫苗中的应用，其特征在于，所述qseC基因缺失部分的核苷酸序列为SEQ ID NO.2，该核苷酸片段缺失导致了 qseC 基因功能的失活。

4.根据权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株在制备促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护的疫苗中的应用，其特征在于，所述基因缺失株PmCQ2Δ hyaD 通过同源重组方法构建，包括如下步骤：（1）用试剂盒提取野生株PmCQ2基因组DNA，以PmCQ2基因组DNA为模板，采用上下游同源臂扩增引物5’ hyaD ARM‑F/ R和3’ hyaD ARM‑F/R分别进行PCR扩增，扩增产物经核酸电泳后，切取目的片段采用胶回收试剂盒回收，分别获纯化的226bp上游同源臂片段和251bp下游同源臂片段；所述试剂盒为DP302‑02，购自天根生物科技有限公司；所述回收试剂盒采用CW2302M，购自康为世纪生物科技有限公司；

（2）以上下游同源臂片段为模板，采用5’ hyaD ARM‑F和3’ hyaD ARM‑R引物继续进行PCR扩增，经核酸电泳和胶回收后获纯化的上下游同源臂融合片段；

（3）含温敏质粒pUC19oriKan R 的大肠杆菌经活化后过夜培养，采用质粒提取试剂盒提取质粒，pUC19oriKan R 经 Bam HI和 Hin dIII于37℃双酶切2小时后，用胶回收试剂盒回收线性化载体片段；所述质粒取试剂盒为CW0500M，购自康为世纪生物科技有限公司；所述Bam HI为1605，购自TaKaRa；所述Hin dIII为1615，购自TaKaRa；

（4）用In‑Fusion® HD Cloning Kit将双酶切后的线性化载体和同源臂片段于37℃恒温水浴锅中连接30分钟后，把连接产物转化到 E  . coli DH5α感受态细胞中，涂布在含有

50 μg/mL Kan抗性LB平板上，37℃恒温过夜培养，挑取菌落，采用引物pUC19‑F/pUC19‑R进行菌落PCR，筛选出阳性克隆，其后进行测序验证；所述In‑Fusion® HD Cloning Kit为PT5162‑1，购自Clontech；

（5）制备PmCQ2电转感受态，重组质粒经电转PmCQ2感受态后，涂布在含有100 μg/mL Kan马丁氏肉汤培养基上，经PCR扩增，筛选出 hyaD 基因缺失菌株，并经连续传代30次保证Kan抗性消除和遗传稳定性。

5.根据权利要求1所述牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失菌株在制备促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉免疫保护的疫苗中的应用，其特征在于，所述基因缺失株PmCQ2ΔqseC通过同源重组方法构建，包括如下步骤：（1）用试剂盒提取野生株PmCQ2基因组DNA，以PmCQ2基因组DNA为模板，采用上下游同源臂扩增引物5’ qseC ARM‑F/ R和3’ qseC ARM‑F/R分别进行PCR扩增，扩增产物经核酸电泳后，切取目的片段采用胶回收试剂盒回收，分别获纯化的350 bp上游同源臂片段和350 bp下游同源臂片段；所述试剂盒为DP302‑02，购自天根生物科技有限公司；所述回收试剂盒为CW2302M，购自康为世纪生物科技有限公司；

（2）以上下游同源臂片段为模板，采用5’ qseC ARM‑F和3’ qseC ARM‑R引物继续进行PCR扩增，经核酸电泳和胶回收后获纯化的上下游同源臂融合片段；

（3）制备PmCQ2电转感受态，重组质粒经电转PmCQ2感受态后，涂布在含有100 μg/mL Kan马丁氏肉汤培养基上，经PCR扩增，筛选出 qseC 基因缺失菌株PmCQ2Δ qseC ，并经连续传代30次保证Kan抗性消除和遗传稳定性。