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专利号: 2023101229680
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种无需使用有机溶剂的裂殖壶菌脂质提取方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤:(1)从‑80℃冰箱取裂殖壶菌保菌管菌液,加入裂殖壶菌种子液培养基中,28℃,170 rpm培养;

(2)裂殖壶菌种子液每隔24 h,转接1 mL菌液至新鲜的种子液培养基中,连续转接两次,获得第三代种子液;

(3)取第三代种子液按1%的接种量接种到裂殖壶菌的发酵培养基中,28℃,170 rpm培养5天,收集发酵液;

(4)向发酵液中逐渐加入2 M NaOH至发酵液pH为10‑12;

(5)加入质量终浓度为0.3%的破壁酶,在50℃,170 rpm条件下处理4‑6 h;

(6)处理后的发酵液进行后续萃取;

(7)将复合表面活性剂替代正己烷添加至发酵液中,混合均匀,8,000 rpm离心5 min;

(8)静止4‑6 h,待两相分层;

(9)8,000 rpm离心5 min,取上清液;

(10)将上清液旋蒸,挥发有机相;

(11)旋蒸结束后,将旋蒸瓶置于60℃烘箱,烘干,称重,获得总脂质。

2.根据权利要求1所述的裂殖壶菌脂质提取方法,其特征在于:所述裂殖壶菌为裂殖壶菌HX‑308。

3.根据权利要求1所述的裂殖壶菌脂质提取方法,其特征在于:所述种子液培养基为:葡萄糖:40‑60 g/L,酵母浸粉:4‑6 g/L,硫酸钠:5‑8 g/L,硫酸镁:2‑4 g/L,硫酸铵:4‑8 g/L,氯化钾:1‑2 g/L,氯化钙:0.1‑0.2 g/L,硫酸钾:0.5‑1 g/L,磷酸二氢钾:0.5‑2 g/L,谷氨酸钠:8‑12g/L,七水合硫酸锌:1‑5 mg/L,六水合氯化钴:0.01‑0.1 mg/L,五水合硫酸铜:

2‑6 mg/L,六水合硫酸镍:1‑2 mg/L,七水合硫酸铁:8‑15 mg/L,泛酸钙:2‑4 mg/L,四水合氯化锰:3‑5 mg/L,二水合钼酸钠:0.02‑0.04 mg/L;

发酵培养基为:葡萄糖:60‑100 g/L,酵母浸粉:5‑15 g/L,硫酸钠:5‑12 g/L,硫酸镁:

2‑4 g/L,硫酸铵:4‑8 g/L,氯化钾:1‑2 g/L,氯化钙:0.1‑0.2 g/L,硫酸钾:0.5‑1 g/L,磷酸二氢钾:0.5‑2 g/L,谷氨酸钠:15‑20 g/L,七水合硫酸锌:1‑5 mg/L,六水合氯化钴:

0.01‑0.1 mg/L,五水合硫酸铜:2‑6 mg/L,六水合硫酸镍:1‑2 mg/L,七水合硫酸铁:8‑15 mg/L,泛酸钙:2‑4 mg/L,四水合氯化锰:3‑5 mg/L, 二水合钼酸钠:0.02‑0.04 mg/L,维生素B6:4‑10 mg/L,维生素B12:0.1‑0.5 mg/L。

4.根据权利要求1所述的裂殖壶菌脂质提取方法,其特征在于:每升发酵液能够获得

69.87±1.75 g的总脂质。

5.根据权利要求1至4任一项所述的裂殖壶菌脂质提取方法,其特征在于:所述复合表面活性剂由十二烷基苯磺酸钠、甜菜碱和吐温80组成。

6.根据权利要求5所述的裂殖壶菌脂质提取方法,其特征在于:所述十二烷基苯磺酸钠在发酵液中的添加终浓度为70 mg/L,甜菜碱在发酵液中的添加终浓度为80 mg/L,吐温80在发酵液中的添加终浓度为3 mL/L。

7.如权利要求1至6任一项所述的裂殖壶菌脂质提取方法在裂殖壶菌脂质提取方面中的应用。