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专利号: 2022117262307
申请人: 淮阴工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-07
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株,将编码蛋白酶yow的信号肽核苷酸序列与优化改造的编码抗原P72的核苷酸序列进行融合构成新的融合基因SyP72转化到解解淀粉芽孢杆菌中得到基因工程菌株,所述融合基因SyP72的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌CPLK1314,其保藏号CCTCCNO:M2017658。

2.一种权利要求1所述的具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程芽孢杆菌的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)对P72蛋白核苷酸序列进行优化改造并与编码蛋白酶yow的信号肽核苷酸序列融合构成新的融合基因SyP72;

(2)将SyP72基因片段与组成型表达载体pTK‑PrepUT1T2分别双酶切,经过酶连和转化,得到重组分泌表达载体pTK‑SyP72;

(3)重组分泌表达载体pTK‑SyP72转入解淀粉芽孢杆菌中,构建得到具有分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程芽孢杆菌yP72。

3.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,步骤(2)所述重组分泌表达载体pTK‑SyP72的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。

4.一种权利要求1所述的基因工程菌在分泌表达关键抗原P72中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述应用过程将基因工程菌yP72接种于优化培养基中活化过夜,再接种到优化培养基中发酵培养,离心收集上清液,在发酵液中成功检测到重组抗原P72表达;所述优化培养基包括:黄豆饼粉 20g/L,胰蛋白 2g/L,酵母提取物 1.5g/L,NaCl 0.5g/L,硫酸镁 0.002g/L,硫酸锰 0.001g/L,磷酸二氢钾 0.0016g/L,pH 

7.0。

6.一种权利要求1所述的基因工程菌在制备预防非洲猪瘟口服疫苗中的应用,所述基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株,将编码蛋白酶yow的信号肽核苷酸序列与优化改造的编码抗原P72的核苷酸序列进行融合构成新的融合基因SyP72转化到解解淀粉芽孢杆菌中得到基因工程菌株,所述融合基因SyP72的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌CPLK1314,其保藏号CCTCCNO:M2017658。