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专利号: 2022117047743
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-25
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种多酶协同表达重组基因工程菌,由如下方法构建获得:采用单质粒双基因表达载体,在其多克隆位点插入甲酸脱氢酶基因和亮氨酸脱氢酶基因,并将其限制性酶位点前的RBS序列替换为CTACCCCCAAGGTTGATAAGGAGGTATTTT,转化宿主细胞,得到所述多酶协同表达重组基因工程菌;所述亮氨酸脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述甲酸脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的重组基因工程菌,其特征在于所述单质粒双基因表达载体为pACYCDuet、pCDFDuet、pETDuet或pRSFDuet之一。

3.如权利要求1所述的重组基因工程菌,其特征在于所述单质粒双基因表达载体为pRSFDuet,在其MCS1和MCS2中插入甲酸脱氢酶基因和亮氨酸脱氢酶基因,获得pRSFDuet‑fdh‑Leudh,并将其MCS1的RBS序列替换为CTACCCCCAAGGTTGATAAGGAGGTATTTT。

4.权利要求1~3之一所述的重组基因工程菌在生物催化制备L‑2‑氨基丁酸中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述应用为:以所述的重组基因工程菌经发酵培养获得的活细胞为催化剂,以L‑苏氨酸为起始底物、甲酸铵作为辅酶循环再生的辅底物,并添加苏氨酸脱氨酶,以去离子水为反应介质构成反应体系,进行酶催化反应,反应结束后,得到含L‑2‑氨基丁酸的反应液,反应液经过分离纯化,得到所述L‑2‑氨基丁酸。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于:所述反应体系中,L‑苏氨酸质量浓度为100~

500g/L,甲酸铵质量浓度为100~200g/L,苏氨酸脱氨酶浓度为20000~30000U/L,重组基因工程菌活细胞以菌体湿重计为10~50g/L,酶催化的温度为25~40℃,反应时间为2~16h,反应开始20~30min后加入0.1~1.0g/L辅酶NAD+。