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专利号: 2022116276868
申请人: 四川轻化工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.斑马鱼免疫无应答性心力衰竭模型的构建方法,其特征在于,利用对羟基苯甲酸丁酯诱导斑马鱼胚胎,从而得到斑马鱼免疫无应答性心力衰竭模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,挑选5‑6hpf发育正常的斑马鱼胚胎,移入添加了1.2‑2.0mg/L对羟基苯甲酸丁酯的斑马鱼胚胎培养液中,在28‑28.5℃下培养,每隔22‑24h换液,培养至3‑3.5dpf得到斑马鱼免疫无应答性心力衰竭模型。

3.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,所述对羟基苯甲酸丁酯的添加量为

1.8mg/L。

4.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,挑选5hpf发育正常的斑马鱼胚胎。

5.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,培养温度为28.5℃。

6.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,培养至3dpf得到斑马鱼免疫无应答性心力衰竭模型。

7.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,每隔24h换液。

8.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,所述斑马鱼为转基因标记品系。

9.根据权利要求8所述的构建方法,其特征在于,所述转基因标记品系为Tg:(myl7:GFP)、Tg(myl7:GFP)×Tg(gata1:Dsred)、Tg(myl7:GFP)×Tg:(mpeg1:mcherry)或Tg(myl7:GFP)×Tg(lyz:Dsred)中的一种或多种。

10.权利要求1‑9任一项所述的斑马鱼免疫无应答性心力衰竭模型的评估方法,包括以下(a)‑(c)中的一种或多种:(a)利用荧光显微镜观察转基因Tg:(myl7:GFP)斑马鱼模型的心脏发育情况,同时进一步采用视频记录,通过tracker软件得到心脏收缩末期和舒张末期图像;

(b)通过荧光共聚焦、体式荧光显微镜拍摄并结合邻联茴香胺染色观察Tg(myl7:GFP)×Tg(gata1:Dsred)杂交斑马鱼模型心脏处红细胞数量、血容量和血流速度情况;并通过qPCR检测心内膜血流反应基因和心钠素、脑钠素转录水平;

(c)通过荧光共聚焦拍摄,观察Tg(myl7:GFP)×Tg:(mpeg1:mcherry)、Tg(myl7:GFP)×Tg(lyz:Dsred)杂交斑马鱼模型心肌组织中巨噬细胞和中性粒数量;并用体式荧光显微镜拍摄Tg(mfap4:GFP)、Tg(lyz:Dsred)转基因斑马鱼模型全身巨噬细胞、中性粒数量状况;并通过qPCR检测心脏区域相关炎症因子转录水平。