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专利号: 2022114254012
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-19
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基因工程菌WTYS1在生产酪醇中的应用,所述基因工程菌WTYS1是对大肠杆菌W3110进行如下改造获得的:敲除tyrR基因、pykF基因、trpD基因和pheA基因;将galP基因的启动子、glk基因的启动子、ppsA基因的启动子和tyrA基因的启动子分别替换为trc启动子;

将编码如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的tyrA基因突变为编码如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的tyrAfbr基因;得到基因工程菌WTY8,将包含Trc启动子和芳香醛合酶基因的重组表达质粒导入所述基因工程菌WTY8,得到基因工程菌WTYS1,所得基因工程菌WTYS1经发酵培养生产酪醇;所述芳香醛合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述重组表达质粒的载体为pTrc99a。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于:所述芳香醛合酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:

1所示。

3.如权利要求1所述的应用,其特征在于:将所述重组表达质粒转入所述基因工程菌WTY8中,经平板筛选,所得阳性克隆即为基因工程菌WTYS1;将所述基因工程菌WTYS1接种到含与所述重组表达质粒抗性相应抗生素的LB液体培养基中,在37 °C、180 rpm条件下培养

14h获得第一阶段种子液,将所述第一阶段种子液按1 %体积接种量接入新鲜含与所述重组表达质粒抗性相应抗生素的LB液体培养基中,于37 °C、180 rpm培养14 h,得到第二阶段种子液,所得第二阶段种子液按照10 %体积接种量转入装有发酵培养基的发酵罐中,通气量1 VVM,于37 °C培养,至OD600达到10时,加入终浓度为0.1 mM的IPTG,20 °C下诱导培养14 h后加入终浓度为20 g/L葡萄糖,30 °C下发酵100 h,发酵过程中补加葡萄糖和酵母粉,使葡萄糖浓度维持在5‑10 g/L。