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1.一种基于DNA‑量子点纳米线的光致电化学生物传感器在检测Hg 和黄曲霉素B1中的应用,其特征是:利用AgInS2量子点标记的DNA纳米线放大信号,结合AgInS2量子点反转NPC‑ZnO纳米多面体的光电流信号,研制了光致电化学生物传感器,通过光电信号“on‑off”检测2+ 2+
模式,实现了对Hg 和黄曲霉素B1双目标高灵敏检测;目标一Hg 引发了DNA循环放大反应,产生大量RDNA,将AgInS2量子点标记的DNA纳米线组装到电极上,实现了光电化学信号“on”2+
检测Hg ;进一步利用目标二黄曲霉素B1竞争结合电极表面的适体,使AgInS2量子点标记的DNA纳米线从电极表面脱落,实现了光电化学信号“off”检测黄曲霉素B1;
具体如下:
步骤1.AgInS2量子点‑DNA纳米线的制备:
取50μL 1μM DNA1和50μL 1μM DNA2加入到离心管中,在95℃下加热5min,自然冷却到室温,得到DNA1与DNA2的杂交产物;
取70μL纯化的AgInS2量子点,向其中加入15μL含有0.1M的EDC和0.025M NHS的混合溶液,活化羧基40min,再向其中加入15μL 10μM的DNA3,将混合溶液放进37℃的摇床里反应6h,得到AgInS2量子点‑DNA3混合物,于3000rpm下重新离心5min,之后分散在100μL水里;然后将DNA1和DNA2的杂交产物加入到AgInS2量子点‑DNA3的混合溶液中,孵育2h,于2000rpm下重新离心5min,分散在200μL水中,得到AgInS2量子点‑DNA纳米线;
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步骤2.目标Hg 诱导扩增过程:
在含有20mM Tris‑HCl、100mM NaCl、1mM EDTA和5mM MgCl2的40μL Tris‑HCl缓冲液中2+
加入30μL 5μM发夹DNA HP、6U的ExoⅢ和30μL的不同浓度的Hg 溶液,将混合物于37℃反应150min得扩增产物RDNA;然后将溶液加热到80℃,时间10min,然后冷却到室温;最后,将RDNA保存在4℃中,以备进一步使用;
步骤3.光致电生物传感器的制备及目标检测:
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取20μL 0.5mg·mL 的氨基化NPC‑ZnO滴到ITO电极上,自然干燥后,将活化好的20μL AFB1适体滴到电极上,孵育2h,接着用2mM巯基己醇封闭修饰电极1h;随后向电极上滴加不2+
同浓度的RDNA,孵育2h后再滴加20μLAgInS2量子点‑DNA纳米线,反应2h,构建检测Hg 的光电生物传感平台;
表1 DNA序列
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上述检测Hg 步骤完成后,再于电极上滴加不同浓度的黄曲霉素B1,孵育2h后,用PBS缓冲液轻微冲洗并在空气中干燥,构建检测黄曲霉素B1的光电传感平台;在含有10mM抗坏血酸的pH 7.4、100mM PBS中进行光电流测量,蓝光作激发光源,ITO作为工作电极,Pt丝作为对电极,Ag/AgCl电极作为参比电极。