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专利号: 2022113350281
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种高产L‑半胱氨酸的基因工程菌,由如下方法构建获得:

(1)以菌株E.coil W3110 EYC为底盘菌株,将其转运蛋白ydeD、yfiK、yeaS和alaE的启动子替换为PyhaO启动子,获得菌株E.coliW3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE;所述菌株E.coil W3110 EYC为菌株CCTCC NO:M 20191026;

(2)构建PyhaO‑apFAB689表达组合体,将菌株E.coliW3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE转运蛋白tolC的启动子替换为PyhaO‑apFAB689,得到菌株E.coliW3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE::PyhaO‑apFAB689‑tolC;

将步骤(2)所得菌株制备成化转感受态,转化发酵质粒pE,得到EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE::PyhaO‑apFAB689‑tolC/pE,即为所述高产L‑半胱氨酸的基因工程菌。

2.如权利要求1所述的高产L‑半胱氨酸的基因工程菌,其特征在于所述启动子PyhaO的序列如SEQ ID NO .1所示。

3.如权利要求1所述的高产L‑半胱氨酸的基因工程菌,其特征在于所述apFAB689的序列如SEQ ID NO .2所示。

4.构建权利要求1所述高产L‑半胱氨酸的基因工程菌的方法,其特征在于所述方法如下:

(1)以菌株E.coil W3110 EYC为底盘菌株,应用CRISPR‑Cas9基因编辑技术,将其转运蛋白ydeD、yfiK、yeaS和alaE的启动子替换为PyhaO启动子,获得菌株E.coliW3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE;所述菌株E.coil W3110 EYC为菌株CCTCC NO:M 

20191026;

(2)构建PyhaO‑apFAB689表达组合体,应用CRISPR‑Cas9基因编辑技术,将菌株E.coliW3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE转运蛋白tolC的启动子替换为PyhaO‑apFAB689,得到菌株E.coliW3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE::PyhaO‑apFAB689‑tolC;

(3)将步骤(2)所得菌株制备成化转感受态,转化发酵质粒pE,得到EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE::PyhaO‑apFAB689‑tolC/pE,即为所述高产L‑半胱氨酸的基因工程菌。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述启动子PyhaO的序列如SEQ ID NO  .1所示,所述apFAB689的序列如SEQ ID NO .2所示。

6.如权利要求1所述的基因工程菌在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述基因工程菌接种至发酵培养基中,在26 37℃、200 800rpm条件下发酵培养60 72 h,发酵结束后取发酵液上清分离纯~ ~ ~化得到L‑半胱氨酸。