1.一种腈水解酶突变体,其特征在于,所述腈水解酶突变体是将SEQ ID No.2所示腈水解酶氨基酸序列的第146位或194位氨基酸进行单突变或多突变获得的。
2.如权利要求1所述腈水解酶突变体,其特征在于,所述腈水解酶突变体是将SEQ IDNo.2所示氨基酸突变为下列之一:(1)第194位的缬氨酸替换为天冬氨酸;(2)第194位的缬氨酸替换为亮氨酸;(3)第146位的亮氨酸替换为苯丙氨酸;(4)第146位的亮氨酸替换为丝氨酸;(5)第194位的缬氨酸突变成天冬氨酸的同时将第146位的亮氨酸突变为苯丙氨酸;
(6)第194位的缬氨酸突变成天冬氨酸的同时将第146位的亮氨酸突变为丝氨酸。
3.一种权利要求1所述腈水解酶突变体的编码基因。
4.一种含权利要求1所述编码基因的重组载体。
5.一种权利要求4所述重组载体构建的重组基因工程菌。
6.一种权利要求1所述腈水解酶突变体在催化2‑氯烟腈制备2‑氯烟酸中的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述的应用以含所述腈水解酶突变体编码基因的工程菌经摇瓶培养后的培养液离心获得的湿菌体或者湿菌体破碎后提取的酶作为生物催化剂,以2‑氯烟腈为底物,以pH为7.0~7.5的缓冲液为反应介质构成转化体系,30~45℃、100~1000r/min条件下进行转化反应,反应结束后取反应液分离纯化,获得2‑氯烟酸。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述反应体系中,底物的加入浓度为50~
1500mM,所述催化剂的用量以菌体细胞干重计为1~5g/L。
9.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述底物分批加入,所述底物的初始加入浓度为50~300mM,每隔0.5~2h补料50~300mM,至总加入量为50~1500mM。
10.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述湿菌体按如下方法制备:将含腈水解酶突变体编码基因的工程菌接种到含终浓度50mg/L卡那霉素的LB培养基中,37℃、180r/min培养12h,随后以体积浓度2%接种量转接到新鲜的含终浓度50mg/L卡那霉素的LB培养基中,37℃、180r/min培养至菌体浓度OD600为0.4~0.8,再向培养基中加入终浓度为0.1~1mM的IPTG,28℃、180r/min诱导培养12h,取培养物离心,收集沉淀即获得湿菌体。