1.一种腈水解酶突变体,其特征在于,所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列突变为下列之一:(1)第162位色氨酸突变为甘氨酸;(2)将第127位异亮氨酸突变为缬氨酸,第162位色氨酸突变为甘氨酸;(3)第162位色氨酸突变为甘氨酸,将第127位异亮氨酸突变为缬氨酸,同时第139位天冬氨酸突变为谷氨酸。
2.一种权利要求1所述的腈水解酶突变体的编码基因。
3.一种权利要求2所述编辑基因构建的重组载体。
4.一种权利要求3所述重组载体转化的重组基因工程菌。
5.一种权利要求1所述腈水解酶突变体在催化2‑氯烟腈水解合成2‑氯烟酸中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:以腈水解酶突变体重组基因工程菌经诱导表达后获得的湿菌体为催化剂,以2‑氯烟腈为底物,以pH值为6‑8的缓冲液为反应介质构成反应体系,在30‑40℃、300‑600rpm下反应,反应结束后,反应液分离纯化获得2‑氯烟酸。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述反应体系中,催化剂的用量以菌体干重计为1‑10g/L;底物加入终浓度为40~160g/L。
8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述底物采用分批方式添加,第一次添加终浓度为40g/L,之后每隔3h补料40g/L至投料总量为160g/L。
9.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将腈水解酶突变体重组基因工程菌接种到含有50μg/mL卡那霉素的液体LB培养基中,37℃,180rpm培养过夜,随后以体积浓度2%的接种量转接到新鲜的含有50μg/mL卡那霉素的液体LB培养基中,
37℃,180rpm培养至菌体浓度OD600为0.6~0.8,随后向培养基中加入终浓度为0.1mM的IPTG,于28℃,180rpm诱导培养12h;将发酵液于4℃下8000rpm离心10min,收集湿菌体;LB液体培养基组成为:蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,NaCl10g/L,pH 7.0。