1.一种长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:将长双歧杆菌活化后连续传代,取最后一次传代的菌液依次在液深15~20cm、10~15cm、6~12cm的培养基中进行如下发酵培养:(1)接种到A培养基中,密封完全状态下,35~37℃发酵培养12~24h;
(2)接种到A培养基中,半密封状态下,35~37℃发酵培养12~24h;
(3)接种到B培养基中,35~37℃有氧发酵培养12~24h;
上述操作视为一轮有氧发酵,如此重复5~10轮;
其中,所述的A培养基为含有2.0~10.0g/L麦角硫因提取液、0.2~1.0g/L维生素C和
0.05~0.5g/L L‑半胱氨酸盐酸盐的MRS培养基;
所述的B培养基为含有2.0~10.0g/L麦角硫因提取液和0.2~1.0g/L维生素C的MRS培养基。
2.根据权利要求1所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法是将长双歧杆菌活化后连续传代5~10代,取最后一次传代的菌液依次在液深16cm、13cm、10cm的培养基中进行所述发酵培养。
3.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:所述的密封完全状态是指:接种到装有A培养基的螺口试管中,拧紧盖子,并封加一层灭菌液体石蜡;
所述的半密封状态是指:接种到装有A培养基的螺口试管中,拧松盖子,不封加一层灭菌液体石蜡。
4.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:所述的A培养基为含有2.0~7.0g/L麦角硫因提取液、0.2~0.8g/L维生素C和0.05~
0.5g/L L‑半胱氨酸盐酸盐的MRS培养基;
所述的B培养基为含有2.0~7.0g/L麦角硫因提取液和0.2~0.8g/L维生素C的MRS培养基。
5.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法包括如下步骤:步骤1:取最后一次传代的菌液按照5%的接种量接种到装有液深16cm A培养基的螺口试管中,拧紧盖子,并封加一层灭菌液体石蜡,密封完全状态下37℃发酵培养18h;
步骤2:按5%的接种量接种到装有液深16cm A培养基的螺口试管中,拧松盖子,不封加液体石蜡,半密封状态下35℃发酵培养18h;
步骤3:按5%的接种量接种到装有液深16cmB培养基的螺口试管中,37℃有氧发酵18h;
步骤4:按5%的接种量接种到装有液深13cm A培养基的螺口试管中,拧紧盖子,并封加一层灭菌液体石蜡,密封完全状态下37℃发酵培养18h;
步骤5:按5%的接种量接种到装有液深13cm A培养基的螺口试管中,拧松盖子,不封加液体石蜡,半密封状态下35℃发酵培养18h;
步骤6:按5%的接种量接种到装有液深13cm B培养基的螺口试管中,35℃有氧发酵
18h;
步骤7:按5%的接种量接种到装有液深10cm A培养基的螺口试管中,拧紧盖子,并封加一层灭菌液体石蜡,密封完全状态下37℃发酵培养18h;
步骤8:按5%的接种量接种到装有液深10cmA培养基的螺口试管中,拧松盖子,不封加液体石蜡,半密封状态下35℃发酵培养18h;
步骤9;按5%的接种量接种到装有液深10cmB培养基的螺口试管中,35℃有氧发酵18h。
6.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:所述的长双歧杆菌活化的操作为:取长双歧杆菌菌液在MRSC固体培养基平板上划线分离,厌氧培养24~48h,待平板上长出单菌落,将单菌落接种在MRSC液体培养基中厌氧培养
24~48h;取菌液按2~10%的接种量进行传代,厌氧条件下,反复传代5~10代,得到活化的菌液。
7.根据权利要求1或2所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:所述的麦角硫因提取液为灵芝的麦角硫因提取液。
8.根据权利要求7所述的长双歧杆菌的高活菌数有氧发酵方法,其特征在于:所述的麦角硫因提取液通过如下方法制备得到:
a.从灵芝种子液中吸取菌液至无菌含有玻璃珠PSB培养基中,28±2℃,150±50r/min培养10±2天;
b.收取菌丝,冲洗,冷冻干燥36±5h;
b.准确称取干燥后菌丝体0.1g,研磨粉碎,加入三级水10mL,300±50W超声提取10±
2min;提取后置于65±5℃水浴30±2min,使用过滤法收集上清液4mL,加入70%乙醇8mL和
1%SDS溶液2mL,4±1℃静置12±2h;将静置后溶液常温8000±100r/min,15±2min离心,取上清;使用氮吹仪,85±5℃,氮吹至4mL以下,使用三级水定容样品至4mL;
c.取出预处理后大孔树脂抽滤收集,向样品液中加入1g,置于摇床30±2℃,150±50r/min震荡4±2h,可得所述的麦角硫因提取液。
9.一种长双歧杆菌,其特征在于:通过权利要求1‑8任一项中所述的方法制备得到。
10.权利要求9中所述的长双歧杆菌在益生菌制品领域中的应用。