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专利号: 2022111230641
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.产赤霉素GA3的基因工程菌,由如下方法构建获得:以藤仓赤霉CCTCC NO: M 2019378为底盘菌,将其基因组中编码细胞色素P450还原酶CPR的基因和编码透明颤菌血红蛋白VHB的基因增强表达,并将编码氮源调控因子AreA的基因和编码全局调控因子Lae1的基因增强表达,获得所述产赤霉素GA3的基因工程菌;

所述将其基因组中编码细胞色素P450还原酶CPR的基因和编码透明颤菌血红蛋白VHB的基因增强表达的方法为:分别构建CPR和VHB基因的体外组装完整基因表达盒,将其导入引入底盘菌藤仓赤霉CCTCC NO: M 2019378中;

所述CPR基因的完整基因表达盒,用来源于pAN7‑1质粒的gpdA启动子和glaA终止子连接细胞色素P450还原酶的编码基因序列,所述细胞色素P450还原酶的编码基因序列如SEQ ID No.3所示,所述gpdA启动子核苷酸序列如SEQ ID No.4所示,所述glaA终止子核苷酸序列如SEQ ID No.5所示;

所述VHB基因的完整基因表达盒,用来源于构巢曲霉的tef1启动子和tef1终止子连接透明颤菌血红蛋白的编码基因序列,所述透明颤菌血红蛋白基因序列如SEQ ID No.1所示,所述tef1启动子核苷酸序列如SEQ ID No.6所示,所述tef1终止子核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。

2.权利要求1所述基因工程菌在微生物发酵制备赤霉素GA3中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述基因工程菌菌株接种于发酵培养基中,于25~30 ℃、200~300 rpm条件下进行发酵培养150~200 h获得含赤霉素GA3的发酵液,发酵液经分离纯化获得所述赤霉素GA3。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵培养基组成如下:玉米淀粉70 90 g/~L,米粉70 90 g/L,大豆粉10 30 g/L,花生粉10 30 g/L,硫酸钾 0.5 1.5 g/L,磷酸二氢钾~ ~ ~ ~

0.5 1.5 g/L,溶剂为水,pH自然,121度灭菌30 min。

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