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专利号: 2021110604987
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种高产赤霉素GA3的藤仓赤霉基因工程菌,由如下方法构建获得:

(1)将藤仓赤霉菌(F. fujikuroi)CCTCC NO:M 2019378的pyrG基因敲除,构建得到营养缺陷型菌株F. fujikuroi ‑ΔpyrG;

(2)将pyrG基因表达框导入F. fujikuroi‑ΔpyrG,同时敲除meaB基因,构建得到菌株F. fujikuroi‑RE:pyrG  ΔmeaB;

(3)用来源于pAN7‑1的gpdA启动子增强表达hmgR基因的催化区域,构建thmgR基因表达框,导入菌株F. fujikuroi‑RE:pyrG  ΔmeaB中,构建得到菌株F. fujikuroi‑RE:pyrGGpdA‑tHmgR  ΔmeaB,即所述高产赤霉素GA3的藤仓赤霉菌基因工程菌。

2.如权利要求1所述的藤仓赤霉基因工程菌,其特征在于所述来源于pAN7‑1的gpdA启动子序列如SEQ ID No.3所示。

3.构建权利要求1所述高产赤霉素GA3的藤仓赤霉基因工程菌的方法,其特征在于所述方法如下:(1)运用CRISPR‑Cas9基因编辑技术,将藤仓赤霉菌(F. fujikuroi)CCTCC NO:M 

2019378的pyrG基因敲除,构建得到营养缺陷型菌株F. fujikuroi ‑ΔpyrG;

(2)运用CRISPR‑Cas9基因编辑技术,将pyrG基因表达框导入F. fujikuroi‑ΔpyrG,同时敲除meaB基因,构建得到菌株F. fujikuroi‑RE:pyrG  ΔmeaB;

(3)运用CRISPR‑Cas9基因编辑技术用来源于pAN7‑1的gpdA启动子增强表达hmgR基因的催化区域,构建thmgR基因表达框,导入菌株F. fujikuroi‑RE:pyrG  ΔmeaB中,构建得到菌株F. fujikuroi‑RE:pyrGGpdA‑tHmgR  ΔmeaB,即所述高产赤霉素GA3的藤仓赤霉菌基因工程菌。

4.权利要求1所述藤仓赤霉基因工程菌在微生物发酵制备赤霉素GA3中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述藤仓赤霉基因工程菌接种至发酵培养基,25~30℃、200~300rpm条件下发酵培养12~48h,获得含赤霉素GA3的发酵液,发酵液经分离纯化获得赤霉素GA3。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述发酵培养基组成如下:玉米淀粉60 90g/~L,米粉70~100g/L,大豆粉3~7 g/L,花生粉3~7 g/L,K2SO4 0.3~0.7 g/L,KH2PO4 0.3~0.7 g/L,溶剂为水,pH自然,121度灭菌30 min。