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专利号: 2022110312930
申请人: 烟台大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,由样品垫、偶联垫、层析膜和吸收垫组成,其特征在于:所述偶联垫上滴加有偶联了SARS‑CoV‑2S蛋白的SiO2@Au@CDs;

所述层析膜的T线处和C线处分别涂覆有兔抗鼠抗体与SARS‑CoV‑2IgG鼠抗体。

2.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,所述偶联垫是采用如下方法制备得到的:将玻璃纤维素膜浸泡于偶联垫处理液中,0~4℃过夜,烘干后备用;

将偶联了SARS‑CoV‑2S蛋白的SiO2@Au@CDs均匀滴加在经偶联垫处理液处理过的玻璃纤维素膜上,真空冷冻干燥后即得偶联垫。

3.根据权利要求2所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,所述偶联垫处理液是采用如下方法制备得到的:先将0.001~0.01g聚乙烯醇、0.001~0.01g Tween‑20、0.01~0.1g牛血清蛋白和0.1~1.0g蔗糖溶于少量pH=7~9的PBS缓冲液中,然后用PBS缓冲液定容至5mL。

4.根据权利要求2所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,所述偶联了SARS‑CoV‑2S蛋白的SiO2@Au@CDs是采用如下方法制备得到的:(1)将SiO2纳米颗粒与PEI溶液混合,超声孵育,结束后用去离子水离心洗涤两次,制备得到SiO2@PEI,将SiO2@PEI重新分散于去离子水中,得到SiO2@PEI分散液;

(2)向SiO2@PEI分散液中加入AuNPs,超声混合,制备得到SiO2@Au,离心收集SiO2@Au,并将其分散于去离子水中,得到SiO2@Au分散液;

(3)将SiO2@Au分散液与PEI水溶液混合,超声,使PEI覆盖在SiO2@Au的表面,然后用去离子水离心洗涤两次,制备得到SiO2@Au@PEI;

(4)向SiO2@Au@PEI中加入CDs,超声混合,形成SiO2@Au@CDs,然后离心,将沉淀保存于乙醇中,制得荧光复合材料SiO2@Au@CDs;

(5)将保存于乙醇中的SiO2@Au@CDs离心,在MES缓冲液中重悬,然后与EDC和NHS混合,超声处理;

(6)将溶液离心,将沉淀在PBS缓冲液中重悬,然后向重悬液中加入SARS‑CoV‑2S蛋白,室温下摇床振荡孵育;

(7)向孵育液中加入BSA,对SiO2@Au@CDs表面未反应的羧基进行封闭,制得偶联SARS‑CoV‑2S蛋白的SiO2@Au@CDs。

5.根据权利要求4所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,制备SiO2@PEI所用的SiO2纳米颗粒为核壳结构,粒径为50~500nm。

6.根据权利要求4所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,制备SiO2@AuNPs所用的AuNPs是采用基于硼氢化钠与柠檬酸钠的还原法制备得到的AuNPs,AuNPs的粒径为1~20nm。

7.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,涂覆层析膜的T线所用的兔抗鼠抗体的浓度为0.5~2.1mg/mL。

8.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,涂覆层析膜的C线所用的SARS‑CoV‑2IgG鼠抗体的浓度为5~10mg/mL。

9.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,所述样品垫是采用如下方法制备得到的:将0.01~0.1g聚乙烯吡咯烷酮、0.01~0.1g TritonX‑100、0.01~0.1g牛血清蛋白和

0.1~1.0g蔗糖溶于少量pH=7~9的PBS缓冲液中,然后用PBS缓冲液定容至5mL,配制得到样品垫处理液;

将聚酯膜浸泡于样品垫处理液中,0~4℃过夜,烘干后即得样品垫。

10.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒抗体的免疫层析试纸条,其特征在于,以未做任何处理的纯棉绒浆滤纸作为吸收垫。