1.一种具有降血脂功效的大黄鱼鱼鳞六肽,其特征在于所述六肽的氨基酸序列为Ser‑His‑Gly‑Pro‑Cys‑Phe(SHGPCF)。
2.如权利要求1所述一种具有降血脂功效的大黄鱼鱼鳞六肽的制备方法,其特征在于包括下述步骤:
1)大黄鱼鱼鳞预处理:将大黄鱼鱼鳞加入到NaOH溶液中,于4℃下浸泡3~5h,脱除非胶原蛋白;处理后的大黄鱼鱼鳞用蒸馏水反复洗涤至中性、沥干,加入到pH 7.4的EDTA‑Na溶液中,于4℃下浸泡24~48h(每天更换12次EDTA溶液),蒸馏水洗涤3次,干燥、粉碎;
2)大黄鱼鱼鳞的酶解:取上述预处理大黄鱼鱼鳞,加入蒸馏水,调温至35~40℃,调节pH值至1.5~2.0,于42KHZ、300W超声20~30min,加入胃蛋白酶,水解解3~4h,于95℃、
15min灭酶活;样品降温至45~50℃时,调节pH值至7.0~8.5,加入中性蛋白酶,反应2~3h,于95℃、15min灭酶,冷却至常温,9000rmp离心15min,收集上清液,即大黄鱼鱼鳞酶解液;
3)大黄鱼鱼鳞降血脂寡肽的制备:将大黄鱼鱼鳞酶解液经截留分子量为1kDa、3kDa和
5kDa的超滤膜进行分级,收集分级组分,检测各组分对HepG2细胞模型中脂质堆积的影响效果,降脂效果最佳超滤组分依次经羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH‑20)柱层析和反相高效液相色谱(RP‑HPLC)纯化,得到大黄鱼鱼鳞降血脂寡肽;
所述步骤1)中NaOH溶液的浓度为0.05mol/L,所述大黄鱼鱼鳞与NaOH溶液的重量体积比为1g:10~15mL;
所述步骤1)中EDTA‑Na溶液的浓度为0.5mol/L,所述大黄鱼鱼鳞与EDTA‑Na溶液的重量体积比为1g:6~10mL;
所述步骤2)中大黄鱼鱼鳞与蒸馏水的重量比为1:10;所述步骤2)中胃蛋白酶的添加量为大黄鱼鱼鳞重量的1.0~1.2%;所述步骤2)中中性蛋白酶的添加量为大黄鱼鱼鳞重量的
1.0~1.5%;步骤3)的羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH‑20)柱层析步骤为:凝胶柱层析:将上述降脂效果最佳超滤组分溶于双蒸水配成浓度为25~30mg/mL的溶液,经过羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH‑20)柱层析(2.0×100cm)分离,用双蒸水进行洗脱,流速0.5~0.6mL/min,根据214nm下的凝胶层析色谱图,收集各色谱峰组分,测定个色谱峰组分对HepG2细胞模型中脂质堆积的影响效果,选择降低脂质堆积效果最好的色谱峰组分,冻干,得大黄鱼鱼鳞降血脂凝胶层析酶解物;
RP‑HPLC步骤:将上述大黄鱼鱼鳞降血脂凝胶层析酶解物用双蒸水配成90~100μg/mL的溶液,利用RP‑HPLC进行纯化,根据制备多肽的降血脂活性得1个高降血脂活性多肽,经测定其序列为:Ser‑His‑Gly‑Pro‑Cys‑Phe(SHGPCF);所述RP‑HPLC条件为:进样量150~200μL;色谱柱Hypersil 300A C18(250mm×10.0mm,10μm);流动相:60%乙腈;洗脱速度1.5~
2.0mL/min;紫外检测波长214nm。
3.如权利要求1所述的大黄鱼鱼鳞六肽在制备降血脂药物中的应用。