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专利号: 2022110000962
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种马面鲀鱼鳔降压肽,其特征在于,所述马面鲀鱼鳔降压肽的氨基酸序列为Ser‑Pro‑Gly‑Phe‑Met (SPGFM),ESI‑MS测定分子量为537.6 Da。

2.如权利要求1所述一种马面鲀鱼鳔降压肽的制备方法,其特征在于包括以下步骤:

1)马面鲀鱼鳔的预处理:将马面鲀鱼鳔解冻、除杂、组织捣碎机中匀浆至糊状,然后加入到NaOH溶液于4℃下浸泡9~12 h,过滤,用蒸馏水将NaOH冲洗干净,干燥,按照1g:8~10 mL加入乙酸乙酯,于室温42 KHZ、300 W超声处理15   20 min,离心除去上清液,得马面鲀~鱼鳔粉末;

2)马面鲀鱼鳔酶解液的制备:将上述马面鲀鱼鳔粉末加入到0.05 mol/L, pH9.5甘氨酸‑NaOH缓冲液中混合,调节混合液pH 值至6.5   7.5,调温度至45   55℃,加入中性蛋白~ ~4

酶5.0×10 U/g,酶解3   5 h;酶解液放于沸水中5   10 min后,灭酶活;调节混合液pH ~ ~4

值至9.5   10.5,调温度至40   45℃,加入碱性蛋白酶5.0×10 U/g,酶解3   5 h;酶解~ ~ ~液放于沸水中5   10 min后,灭酶活;得马面鲀鱼鳔酶解液;

~

3)马面鲀鱼鳔酶解液的超滤分级:将马面鲀鱼鳔酶解液采用1 kDa,5 kDa和10 kDa超滤膜进行超滤处理,分别收集分子量小于1 kDa、1‑5 kDa、5‑10 kDa、大于10 kD的组分,测定各组分的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性,最高ACE抑制活性组分即为超滤酶解液,冻干,得超滤酶解物;

4)马面鲀鱼鳔降压肽的制备:将超滤酶解物依次经羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH‑

20)柱层析和反相高效液相色谱(RP‑HPLC)纯化,得马面鲀鱼鳔降压肽;

其中,所述步骤1)中马面鲀为绿鳍马面鲀(Thamnaconus modestus);所述步骤1)中NaOH溶液的浓度为0.05 mol/L,马面鲀鱼鳔与NaOH溶液的重量体积比为1 g:10~15 mL;所述步骤1)中马面鲀鱼鳔与乙酸乙酯的重量体积比为1g:8~10 mL;所述步骤2)中甘氨酸‑NaOH缓冲液的浓度为0.05 mol/L,pH为9.5; 所述步骤2)中马面鲀鱼鳔粉末与甘氨酸‑NaOH缓冲液的重量体积比为1g:6   8mL;所述步骤2)中中性蛋白酶的添加量为马面鲀鱼鳔粉末~质量的1.0   2.0%;所述步骤2)中碱性蛋白酶的添加量为马面鲀鱼鳔粉末质量的1.0   ~ ~

2.0%;所述步骤4)中的羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH‑20)色谱纯化和RP‑HPLC纯化为:羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH‑20)色谱纯化:将超滤酶解物配成45   55 μg/mL溶~液,经过羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH‑20)柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据214 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,具有最高ACE抑制活性的峰为凝胶层析酶解物,冻干;

RP‑HPLC纯化:将上述马面鲀鱼鳔凝胶层析酶解物用双蒸水配成90 100 μg/mL的溶液,~利用RP‑HPLC进行纯化,根据制备寡肽的ACE抑制活性得1个高活性寡肽Ser‑Pro‑Gly‑Phe‑Met (SPGFM),ESI‑MS测定分子量为537.6 Da;所述RP‑HPLC条件为:进样量180 200 μL;色~谱柱Hypersil 300A C18:250 mm×10.0 mm,10 μm;流动相:60%乙腈;洗脱速度1.5~2.0 mL/min;紫外检测波长214 nm。

3.如权利要求1所述一种马面鲀鱼鳔降压肽在制备治疗高血压药物中的应用。