利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2022109685969
申请人: 齐鲁工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-06-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1. 具有抗氧化、抗衰老活性的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法的步骤如下:S1:钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的提取

(1)将钝顶螺旋藻粉按1:10‑20的比例(w/v)分散到蒸馏水中,浸泡6‑12小时,‑20℃冷冻12 24 h,然后用流水或37℃水浴融化,反复3次;6000 rpm离心15 min,取上清液,即为蛋~白粗提液;

(2)在蛋白粗提液中加入研磨的硫酸铵粉末,使其饱和度为60%;边加边搅拌,至硫酸铵完全溶解后继续搅拌2小时;然后置冰箱冷藏室,静置6‑12小时;10000 rpm离心15 min,取沉淀;沉淀用适量的PBS重溶,将重悬液用透析袋透析,透析过程中更换PBS3次;透析液用

6000 rpm离心15 min,取上清液;上清液即为钝顶螺旋藻藻蓝蛋白粗提液;所述PBS的pH为

6.5;

(3)吸取适量上述藻蓝蛋白粗提液,加到PBS平衡的DEAE Sepharose Fast Flow层析柱中,阴离子交换层析法纯化藻蓝蛋白;先用PBS冲洗层析柱,去除杂质和多余的样品,再用含

0.3M NaCl的PBS溶液直接洗脱,收集蓝色洗脱液;用透析袋透析,透析过程中更换超纯水3次;透析液用6000 rpm离心15 min,取上清液,即为纯化的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白溶液;所述PBS的pH为6.5;

S2钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的酶解及其超滤组分制备

(1)调节钝顶螺旋藻藻蓝蛋白溶液的pH为10.5,然后加入3000 U/g的碱性蛋白酶,混匀后置于摇床中振荡酶解,摇床转速为100‑200rpm,酶解时间200‑300 min,酶解温度40℃;

(2)酶解结束,酶解液沸水浴10 min,灭活残留的酶;

(3)4℃条件下10000‑12000 rpm离心15 min,收集上清液,弃沉淀;上清液即为钝顶螺旋藻藻蓝蛋白肽溶液;

(4)使用截留分子量为3 kDa的超滤离心管,6000 rpm离心30 min,吸取超滤管中截留的溶液,即为分子量<3 kDa的超滤组分;

(5)收集分子量<3 kDa的超滤组分,冷冻真空干燥制备钝顶螺旋藻藻蓝蛋白肽冻干粉;

所述钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽由Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑Phe、Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑Val‑Leu和Gly‑Trp组成。

2.如权利要求1所述制备方法获得的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽制备抗氧化、抗衰老化妆品和药品中的应用;

所述钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽由Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑Phe、Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑Val‑Leu和Gly‑Trp组成。