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专利号: 2022109685649
申请人: 齐鲁工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-06-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.钝顶螺旋藻藻蓝蛋白血管紧张素转化酶抑制肽在制备具有治疗高血压作用的药物中的应用,其特征在于,所述血管紧张素转化酶抑制肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示;

所述SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的氨基酸序列分别为:Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑Phe(FPPWF)、Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑Val‑Leu(FPPWVL)和Gly‑Trp(GW)。

2.钝顶螺旋藻藻蓝蛋白血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法,其特征在于,所述肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示;所述方法包括以下步骤:(1)钝顶螺旋藻C‑藻蓝蛋白的提取:对钝顶螺旋藻进行C‑藻蓝蛋白的提取,得到钝顶螺旋藻C‑藻蓝蛋白溶液;

(2)酶解:使用酶法对步骤(1)所得的钝顶螺旋藻C‑藻蓝蛋白溶液进行水解,得到钝顶螺旋藻藻蓝蛋白肽溶液;

(3)超滤:对步骤(2)所得的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白肽溶液进行超滤处理,得到超滤组分;

(4)筛选:对步骤(3)所得的超滤组分进行筛选,即得到所述的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白血管紧张素转化酶抑制肽;

步骤(2)所述酶解具体包括以下步骤:

调节C‑藻蓝蛋白溶液的pH值为10.5,然后加入碱性蛋白酶,混匀后置于摇床中振荡酶解;酶解时间200‑300 min,酶解温度40℃;

酶解结束,酶解液沸水浴,灭活残留的酶;

离心,收集上清液,弃沉淀,上清液即为钝顶螺旋藻藻蓝蛋白肽溶液;

步骤(3)所述超滤具体为:使用截留分子量为3 kDa的超滤离心管,离心,吸取超滤管中截留的溶液,即为分子量<3 kDa的超滤组分;

步骤(4)所述筛选具体包括以下步骤:

通过超高效液相色谱‑串联质谱法得到超滤组分中置信度较高的肽段序列;

对得到的肽段序列进行虚拟筛选,根据生物信息学预测打分及肽与ACE分子对接分析结果,筛选无毒性、生物学活性高、能与ACE分子对接的多肽,即为所述的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白血管紧张素转化酶抑制肽。

3.根据权利要求2所述的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述钝顶螺旋藻C‑藻蓝蛋白的提取具体包括以下步骤:将钝顶螺旋藻粉分散到蒸馏水中,浸泡、冷冻、融化,反复多次,然后离心,取上清液,即为蛋白粗提液;

在蛋白粗提液中加入硫酸铵粉末,静置,离心,取沉淀,将沉淀重溶,进行透析,透析液离心,取上清液,即为钝顶螺旋藻C‑藻蓝蛋白粗提液;

取C‑藻蓝蛋白粗提液,用阴离子交换层析法纯化C‑藻蓝蛋白,得到纯化的C‑藻蓝蛋白溶液。

4.根据权利要求2所述的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法,其特征在于,需要对所述抑制肽进行体外活性测定:高效液相色谱法体外测定多肽的血管紧张素转化酶抑制活性。