1.一种丁酰胆碱酯酶检测试剂盒,其特征在于:所述丁酰胆碱酯酶检测试剂盒包含试剂储备液a和荧光探针试剂储备液b;所述试剂储备液a与荧光探针试剂储备液b的体积比为
100:1;所述试剂储备液a由磷酸盐组成;所述荧光探针试剂储备液b包括近红外化合物以及二甲基亚砜;
所述近红外化合物的结构式如式(I)所示:
2.根据权利要求1所述的丁酰胆碱酯酶检测试剂盒,其特征在于:所述试剂储备液a的pH值为7.4;所述磷酸盐的浓度为10mmol/L;所述荧光探针试剂储备液b中,近红外化合物的浓度为0.01mmol/L~1mmol/L;所述磷酸盐是Na2HPO4、NaH2PO4和KH2PO4中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的丁酰胆碱酯酶检测试剂盒,其特征在于:所述近红外化合物按照如下步骤制备而成:
1)制备式(III)所示的化合物,备用;
1.1)将反应溶剂分为等体积的两份,将间苯二酚和碳酸钾溶于第一份反应溶剂中,在氮气保护下搅拌,然后加入溶有IR‑780碘化物的第二份反应溶剂,混合后,在45℃~55℃下反应2h~5h得到粗产物;
1.2)采用二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂,对步骤1.1)的粗产物进行分离提纯,得到式(III)所示的化合物
2)制备式(I)所示的近红外化合物
2.1)将步骤1.2)得到的式(III)所示的化合物与碳酸钾混合,并溶于乙腈中,在室温和氮气保护下,搅拌20~40min得到反应混合液A;
2.2)向步骤2.1)的反应混合液A中加入1mL二甲氨基甲酰氯,在室温下,每反应24h加入
0.5mL二甲氨基甲酰氯,反应结束时,共加入2.5mL二甲氨基甲酰氯;最后在减压下蒸发得到蓝紫色固体粉末,即为粗产物;
2.3)步骤2.2)合成的粗产物用二氯甲烷/甲醇洗脱、分离得到固体粉末,即为式(I)所示的近红外化合物。
4.根据权利要求3所述的丁酰胆碱酯酶检测试剂盒,其特征在于:所述步骤1.1)中,间苯二酚、碳酸钾和IR‑780碘化物的物料摩尔比为1:1:1.5~2;反应溶剂总体积用量为6~
10mL;所述反应溶剂为乙腈;
所述步骤1.2)中,二氯甲烷/甲醇的体积比为20:1~100:1。
5.根据权利要求3所述的丁酰胆碱酯酶检测试剂盒,其特征在于:所述步骤2.1)中,式(III)化合物和碳酸钾的质量比为1:1.5~2;所述乙腈用量比为5ml;所述步骤2.3)中,二氯甲烷/甲醇的体积比为20:1~100:1。
6.一种如权利要求1所述的丁酰胆碱酯酶检测试剂盒在非疾病治疗或非疾病诊断的丁酰胆碱酯酶定量检测中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:
A1)以600nm作为激发波长,测定空白样品在发射波长为677nm处的荧光强度,记为F0;
所述空白样品是由试剂储备液a和荧光探针试剂储备液b混合而成的;
A2)将空白样品用试剂储备液a定容得到混合溶液,混合溶液中近红外化合物浓度为10μmol/L;取多份等体积的混合溶液,分别对应加入不同已知浓度的丁酰胆碱酯酶作为丁酰胆碱酯酶标准品溶液,以600nm作为激发波长,分别测定丁酰胆碱酯酶标准品溶液在发射波长630nm~850nm处的荧光强度记为F,得到多个不同的荧光强度差值ΔF=F–F0;以丁酰胆碱酯酶的浓度C为横坐标,荧光强度差值ΔF为纵坐标,绘制曲线并拟合得到标准方程;
A3)取含有丁酰胆碱酯酶的待检测样品,加入空白样品中,以600nm作为激发波长,检测待测样品在发射波长630nm~850nm处的荧光强度F’,将(F’‑F0)的差值代入步骤A2)所得标准方程中,计算得出待测样品中丁酰胆碱酯酶的浓度。
8.一种如权利要求1所述的丁酰胆碱酯酶检测试剂盒在非疾病治疗或非疾病诊断的丁酰胆碱酯酶快速检测中的应用。