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专利号: 2022103602252
申请人: 山东省分析测试中心
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于适配体特异性识别的生物传感器,其特征在于,包括基于液晶微滴的生物传感器,还包括核酸产物扩增模块;

所述基于液晶微滴的生物传感器中至少具有液晶分散体系及表面活性剂B,所述液晶分散体系中含有液晶微滴,所述液晶微滴包裹酶及表面活性剂A,并且表面活性剂A和表面活性剂B为相反离子型的表面活性剂;

所述核酸产物扩增模块中包括一种预组装磁珠,所述磁珠负载引物及适配体的杂交链;另外,所述核酸产物扩增模块还具有挂锁DNA、DNA连接酶、DNA聚合酶及核酸底物;

所述表面活性剂A为SDS,表面活性剂B为CTAB;

或,所述表面活性剂A为SMP,所述表面活性剂B为CTAB;

或,所述表面活性剂A为SDS,所述表面活性剂B为DTAB;

所述液晶微滴中包裹的酶为检测反应中的催化酶,选自辣根过氧化物酶。

2.如权利要求1所述基于适配体特异性识别的生物传感器,其特征在于,所述液晶分散体系及液晶微滴中的液晶选自5CB、E7中的一种或其组合。

3.如权利要求1所述基于适配体特异性识别的生物传感器,其特征在于,所述液晶微滴的制备方式如下:加热液晶至相变温度范围内,将表面活性剂A及酶混合后滴入上述温度范围的液晶中,通过涡旋及超声得到分散在液晶分散体系中的液晶微滴;

或,所述表面活性剂B中具有酶的催化底物,或所述液晶分散体系中还具有染料或显色剂;所述酶在表面活性剂B的作用下释放,将催化底物催化成显色底物,所述显色底物在显色剂的作用下改变液晶分散体系的吸光度。

4.如权利要求1所述基于适配体特异性识别的生物传感器,其特征在于,所述磁珠为链霉亲和素功能化的磁珠,所述预组装磁珠的制备方式如下:将引物与链霉亲和素功能化的磁珠在30~40℃条件下共同孵育18~22min;通过磁选分离孵育后的磁珠再加入适配体溶液中孵育35~45min中得到所述预组装磁珠。

5.如权利要求1所述基于适配体特异性识别的生物传感器,其特征在于,所述适配体、引物及挂锁DNA的序列依据检测目标而设计,检测目标为黄曲霉素时,所述适配体、引物及挂锁DNA的序列如下:引物:Biotin‑A6‑TCA CAC TGT GGG CCT AGG ACG C;

适配体:GTT GGG CAC GTG TTG TCT CTC TGT GTC TCG TGC CCT TCG CTA GGC CCA CA;

挂锁DNA:Phosphate‑CCA CAG TGT GAC TAG GCC CAC ATA ATC TAG GCC CAC AGC GTC CTA GGC。

6.如权利要求1‑5任一项所述基于适配体特异性识别的生物传感器,其特征在于,所述酶为HRP、所述表面活性剂A为SDS,所述表面活性剂B为CTAB,所述显色剂为3,3',5,5'‑四甲基联苯胺,所述液晶为5CB;

所述液晶微滴的制备方法如下:将液晶加热至相变温度以上,将HRP溶解在15~20mM浓度的SDS溶液中,制得终浓度为0.008~0.012mg/mL的HRP溶液;将所述HRP溶液加入液晶中涡旋2~5min,超声8~12min,得到分散在液相中的液晶微滴,所述HRP溶液与液晶的体积比为1:8~10。

7.一种基于适配体特异性识别的检测方法,其特征在于,所述检测方法基于权利要求1所述生物传感器实现,包括如下步骤:将检测目标与预组装磁珠混合孵育一段时候,并通过磁分离;向分离后的磁珠中加入挂锁DNA及连接酶孵育一段时间后继续加入DNA聚合酶及核酸底物孵育一段时间获得核酸扩增产物,将所述核酸扩增产物与表面活性剂B混合后加入液晶分散体系中,并对液晶分散体系的吸光度进行检测。

8.如权利要求7所述基于适配体特异性识别的检测方法,其特征在于,所述检测方法为一种黄曲霉素的检测方法,具体的检测步骤如下:将待测物与预组装的磁珠混合孵育25~

35min,通过磁选分离磁珠并清洗,向清洗后的磁珠中加入去离子水、挂锁DNA、连接酶反应缓冲液、T4 DNA连接酶,15~17℃孵育0.5~1.5h后收集磁珠;经过3次水洗‑磁分离过程后,继续加入水、DNA聚合酶反应缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶的混合液,在28~32℃下孵育70~

90min;升温至60~70℃反应8~12min终止核酸物质扩增,将反应体系中的核酸扩增产物与CTAB混合加入液晶微滴溶液中,释放出的HRP将TMB氧化,发生显色反应,使用酶标仪在

450nm处测定吸光度,确定目标物浓度。

9.如权利要求8所述的基于适配体特异性识别的检测方法,其特征在于,所述CTAB的溶液适宜浓度在10~200μM。