1.一种诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)分别将探针溶液与不同浓度的镉离子样品溶液充分反应;其中,探针5’端环化,中间部分形成双链,另一端成游离状态,当镉离子存在时,探针被诱导成哑铃型;
(2)然后加入引物,进行孵育;
(3)将步骤(2)所得产物加入含有T4连接酶的缓冲液中,孵育,使得整个探针形成闭合哑铃型模板;
(4)将步骤(3)所得产物与Phi 29DNA聚合酶反应,得到滚环扩增产物;
(5)在步骤(4)得到的产物中加入荧光染料SYBR Green I溶液,使染料插入到双链DNA的小沟中,在500-540nm的激发波长下,用紫外分光光度计进行检测样品,然后在477-517nm的激发波下测得的荧光强度;
(6)使用Real-Time PCR方法对(4)中的样品进行检测,验证准确性。
2.根据权利要求1所述的诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于,步骤(3)中所述的含有T4连接酶的缓冲液含有Tris-HCl、MgCl2、DTT、ATP。
3.根据权利要求书1所述的诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于,步骤(4)中滚环扩增反应所加入的缓冲液含有Tris-HCl、MgCl2、(NH4)2SO4、DTT,同时还加入BSA、dNTP。
4.根据权利要求书1所述的诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于,步骤(5)中所述荧光染料SYBR Green I溶液是用含有EDTA的Tris-HCl缓冲液稀释荧光染料SYBR Green I溶液后所得。
5.根据权利要求1所述的诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于:探针序列:
5’P-GGGCAGTGATCCAGAGGAAGGAGAGGATCACTGCCCCCTAGGACTGTTGTGGTATTATTTTTGGTTGTGCTAGG-OH3’;
引物序列:5’-CTCTCCTTCCTCTG-3’。
6.根据权利要求1所述的诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于,步骤(5)中加入的SYBR Green I溶液与步骤(4)得到的产物溶液的体积比1/5-1/15,室温下混合孵育10-40min;测得荧光强度是使用荧光分光光度计进行测量。
7.根据权利要求1所述的一种诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于,步骤(1)中的含镉离子样品的浓度为0-100μg/L。