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专利号: 2020107203498
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)分别将探针溶液与不同浓度的镉离子样品溶液充分反应;其中,探针5’端环化,中间部分形成双链,另一端成游离状态,当镉离子存在时,探针被诱导成哑铃型;镉离子样品的浓度为0‑100μg/L;

(2)然后加入引物,进行孵育;

(3)将步骤(2)所得产物加入含有T4连接酶的缓冲液中,孵育,使得整个探针形成闭合哑铃型模板;所述的含有T4连接酶的缓冲液含有Tris‑HCl、MgCl2、DTT、ATP;

(4)将步骤(3)所得产物与Phi 29 DNA聚合酶反应,得到滚环扩增产物;滚环扩增反应所加入的缓冲液含有Tris‑HCl、MgCl2、(NH4)2SO4、DTT,同时还加入BSA、dNTP;

(5)在步骤(4)得到的产物中加入荧光染料SYBR Green I溶液,使染料插入到双链DNA的小沟中,在500‑540nm的激发波长下,用紫外分光光度计进行检测样品,然后在477‑517nm的激发波下测得的荧光强度;所述荧光染料SYBR Green I溶液是用含有EDTA的Tris‑HCl缓冲液稀释荧光染料SYBR Green I溶液后所得;加入的SYBR Green I溶液与步骤(4)得到的产物溶液的体积比1/5‑1/15,室温下混合孵育10‑40min;测得荧光强度是使用荧光分光光度计进行测量;

(6)使用Real‑Time PCR方法对(4)中的样品进行检测,验证准确性;

探针序列:

5’P‑GGGCAGTGATCCAGAGGAAGGAGAGGATCACTGCCCCCTAGGACTGTTGTGGTATTATTTTTGGTTGTGCTAGG‑OH 3’;

引物序列:5’‑CTCTCCTTCCTCTG‑3’。