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专利号: 2022103501302
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酶法合成布瓦西坦手性中间体的方法,其特征在于,所述方法为利用具有腈水解活性的酶催化3‑氰基己腈水解合成布瓦西坦手性中间体(R)‑3‑氰基己酸;

所述的具有腈水解活性的酶为腈水解酶;

所述腈水解酶是将SEQ ID NO  .2所示氨基酸序列第140位进行单突变获得的,所述单突变腈水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO .4所示;或所述腈水解酶是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第140位和第175位氨基酸进行双突变获得的,所述腈水解酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.6所示。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的方法为:将含具有腈水解活性的酶编码基因的重组基因工程菌经诱导表达后获得的含腈水解酶的湿菌体为催化剂,以3‑氰基己腈为底物,以pH7‑8的缓冲液或水为介质构成反应体系,在20‑40℃、200‑600 rpm条件下反应完全后,反应液分离纯化获得(R)‑3‑氰基己酸。

3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述反应体系中,催化剂的用量以菌体干重计为1‑10 g/L,底物浓度为100‑300 g/L。

4.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述催化剂按如下方法制备:将含具有腈水解活性的酶编码基因的重组基因工程菌接种至含50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃培养过夜,再以体积浓度2%接种量接种到含50 μg/mL卡那霉素LB培养基中,37℃,150 rpm培养至菌体浓度OD600=0.6,加入终浓度为0.1 mM的IPTG,28℃诱导培养12 h后,4℃、

12000 rpm离心10 min,收集含腈水解酶的湿菌体。

5.如权利要求2所述的方法,所述催化剂为所述湿菌体经破碎提取的粗酶、粗酶纯化后的纯酶、固定化湿菌体细胞或者固定化提取的粗酶。