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专利号: 2025100745648
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高催化活力和立体选择性的腈水解酶突变体,其特征在于,所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列突变为下列之一:(1)第52位脯氨酸突变为色氨酸;(2) 第52位脯氨酸突变为色氨酸,且第62位谷氨酸突变为亮氨酸;(3)第52位脯氨酸突变为色氨酸,第62位谷氨酸突变为亮氨酸,且第107位甘氨酸突变为甲硫氨酸。

2.一种含权利要求1所述腈水解酶突变体的编码基因的重组基因工程菌。

3.一种权利要求1所述腈水解酶突变体在催化外消旋3‑氰基己腈制备(R)‑3‑氰基己酸中的应用。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述应用的方法为:以含有所述腈水解酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以外消旋3‑氰基己腈为底物,以pH为7 8的缓冲液为反应介质构成反应体系,在20~40℃、300~600 rpm条件下水浴反应~结束后,将反应液分离纯化,获得(R)‑3‑氰基己酸。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述反应体系中底物浓度为100~200 g/L,催化剂的用量以湿菌体重量计为5~25 g/L。

6.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述反应介质为100mM、pH值为8的磷酸盐缓冲液,催化反应温度为30℃。

7.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述湿菌体按如下方法制备:

将含有所述腈水解酶突变体编码基因的工程菌接种至含50 μg/mL卡那霉素的LB培养基中,在37℃、180rpm培养8‑12 h,获得种子液;再将种子液以体积浓度2%接种量接种至新鲜的含有终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、180rpm培养至菌体浓度OD600达到0.6~0.8,再向培养液中加入终浓度为0.1 mM异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷,28℃、

180rpm诱导培养12 h,4℃、12000 rpm条件下离心10 min,收集湿菌体。