1.一种蔗糖磷酸化酶突变体,由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蔗糖磷酸化酶(BbrSPase)经单点突变或多点突变获得,所述单点突变或多点突变的突变位点为下列之一或其中两种以上:(1)第134位脯氨酸,(2)第341位亮氨酸,(3)第343位亮氨酸。
2.如权利要求1所述蔗糖磷酸化酶突变体,其特征在于所述点突变为下列之一或其中两种以上:(1)第134位脯氨酸突变为半胱氨酸,(2)第341位亮氨酸突变为异亮氨酸或缬氨酸,(3)第343位亮氨酸突变为异亮氨酸。
3.如权利要求1所述蔗糖磷酸化酶突变体,其特征在于所述蔗糖磷酸化酶突变体为下列之一:(1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第134位脯氨酸突变为半胱氨酸;
(2)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位亮氨酸突变为异亮氨酸;
(3)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突变为缬氨酸;
(4)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第343位的亮氨酸突变为异亮氨酸;
(5)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突变为异亮氨酸,第343位的亮氨酸突变为异亮氨酸;
(6)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突变为异亮氨酸,第343位的亮氨酸突变为脯氨酸;
(7)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突变为缬氨酸,第
343位的亮氨酸突变为脯氨酸;
(8)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突变为异亮氨酸,第343位的亮氨酸突变为天冬酰胺。
4.权利要求1所述蔗糖磷酸化酶突变体的编码基因。
5.如权利要求2所述的编码基因,其特征在于所述编码基因核苷酸序列如SEQ ID No.3
10之一所示。
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6.含有权利要求4所述编码基因的重组表达载体。
7.含有权利要求4所述编码基因的工程菌。
8.权利要求1所述蔗糖磷酸化酶突变体在酶法制备L‑抗坏血酸葡萄糖苷中的应用。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述L‑抗坏血酸葡萄糖苷为L‑抗坏血酸‑2‑葡萄苷。
10.如权利要求8或9所述的应用,其特征在于所述应用为:以L‑抗坏血酸和蔗糖为底物,加入所述蔗糖磷酸化酶突变体或其重组表达载体转化至宿主微生物中获得基因工程菌菌体细胞,在20~60℃条件下,于pH 4.0~6.5的催化体系中反应,得到含有L‑抗坏血酸葡萄糖苷的催化液。