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专利号: 2022101097704
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种糖醛酸脱氢酶突变体,其特征在于,所述突变体包括、A97H、L104F、A110V、T170V、E231K、E242N、A97H/L104F、A97H/E231K、L104F/E231K、A110V/T170V、A97H/L104F/E231K、A110V/T170V/E242N、A97H/E231K/E242N中的任意一种或者多种,所述突变体对应的野生型氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

2.一种糖醛酸脱氢酶突变体,其特征在于,所述突变体对应的野生型的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述突变体A97H,即第97位丙氨酸密码子GCG突变为了组氨酸密码子CAT;所述突变体L104F,即第104位亮氨酸密码子CTG突变为了苯丙氨酸密码子TTT;所述突变体A110V,即第110位丙氨酸密码子GCG突变为了缬氨酸密码子GTT;所述突变体T170V,即第170位苏氨酸密码子ACC突变为了缬氨酸密码子GTT;所述突变体E231K,即第231位谷氨酸密码子GAA突变为了赖氨酸密码子AAA;所述突变体E242N,即第242位谷氨酸密码子GAA突变为了天冬酰胺密码子AAT;所述突变体A97H/L104F,即第97位丙氨酸密码子GCG突变为了组氨酸密码子CAT,同时第104位亮氨酸密码子CTG突变为了苯丙氨酸密码子TTT;所述突变体A97H/E231K,即第97位丙氨酸密码子GCG突变为了组氨酸密码子CAT,同时第231位谷氨酸密码子GAA突变为了赖氨酸密码子AAA;所述突变体L104F/E231K,即第104位亮氨酸密码子CTG突变为了苯丙氨酸密码子TTT,同时第231位谷氨酸密码子GAA突变为了赖氨酸密码子AAA;

所述突变体A110V/T170V,即第110位丙氨酸密码子GCG突变为了缬氨酸密码子GTT,同时第

170位苏氨酸密码子ACC突变为了缬氨酸密码子GTT;所述突变体A97H/L104F/E231K,即第97位丙氨酸密码子GCG突变为了组氨酸密码子CAT、第104位亮氨酸密码子CTG突变为了苯丙氨酸密码子TTT且第231位谷氨酸密码子GAA突变为了赖氨酸密码子AAA;所述突变体A110V/T170V/E242N,即第110位丙氨酸密码子GCG突变为了缬氨酸密码子GTT、第170位苏氨酸密码子ACC突变为了缬氨酸密码子GTT且第242位谷氨酸密码子GAA突变为了天冬酰胺密码子AAT;所述突变体A97H/E231K/E242N,即第97位丙氨酸密码子GCG突变为了组氨酸密码子CAT、第231位谷氨酸密码子GAA突变为了赖氨酸密码子AAA且第242位谷氨酸密码子GAA突变为了天冬酰胺密码子AAT。

3.一种重组质粒,其特征在于,所述重组质粒携带权利要求2任意所述的突变体的基因。

4.根据权利要求3所述的重组质粒,其特征在于,所述重组质粒的表达载体为pET‑20b(+)质粒。

5.一种重组菌,其特征在于,所述重组菌携带权利要求2任一所述的突变体基因或权利要求3的所述重组质粒。

6.根据权利要求5所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌宿主为E.coli BL21(DE3)。

7.一种权利要求1或者2所述的糖醛酸脱氢酶突变体或者权利要求3所述的重组质粒或者权利要求5所述的重组菌在生产糖二酸中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的应用包括如下步骤:构建反应体系,底物为糖醛酸,加入糖醛酸脱氢酶突变体,在缓冲液下反应得到转化液,其中含有糖二酸。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,在缓冲液下反应得到转化液其转化温度为

45~55℃,pH为7.0~7.5,转化时间为1~6 h,底物糖醛酸浓度为0.2~100 mg/mL,酶添加量为0.1~50 U/mL。

10.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,重组菌在生产糖二酸过程为:将大肠杆菌工程菌发酵培养,获得种子液;将种子液接种至发酵培养基内进行高密度培养,然后向其中加入诱导剂,继续培养,获得发酵液;将发酵液离心收集菌体,洗涤,离心后再用洗涤液重悬细胞;将透性化试剂加入细胞悬液处理后离心收集细胞,洗涤重悬后,再次离心;将细胞加入反应液进行全细胞转化,获得糖二酸。